荧光染料R藻红蛋白标记小鼠抗人C4单克隆抗体-D.pdfVIP

32 2006年盟 34卷第2期 Ir inMicrobiolImmunolMay．2o06．V01．34No．2 荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体 赵亚杰，闭兰，孙可芳，端义坤，詹 骞，金玉玲，吕兰君，张爱华’ (武汉生物制品研究所，武汉 430060) 摘 要：以R一藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体，形成单色或和用其他荧光染料标记的cD系列单抗 组成双色、多色的荧光试剂，应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂 SPDP和SMCC分别活化 R．PE和 CD4单抗，用D1Tr使经 SPDP活化后的R-PE巯基化，再与用SMCC活化的CIM单抗交联。使用NEM终止交联反 应，经SephacrylS-300柱在AKTAFPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R．PE标记的抗 CIM单抗，检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达，经流式细胞仪(简称FACS)分析表明，R—PE标记的 CIM抗体特异性保持完好，荧光强度较高，还可与用FITC标记的其它cD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用 SPDP，SMCC异双功能交联试剂和DTr还原剂，成功地偶联了R一藻红蛋 白和 CD4单克隆抗体，可应用于流式细胞 仪检测分析。 关键词：R-藻红蛋白 ；小鼠抗人CIM单克隆抗体 中圈分类号：B392．1l 文献标识码：A 文章编号：1005-5673(2006)02-0032-03 PreparationconjugateofR-phycoerythrintomouseanti-humanCD4monoclonalantibody ZIIAO 。BILan， SUNlle-fang。et ．(Wuhan tM招ofBiologicalProducts．Wuhan430060，China) Abstract：TheconjugateofRphycoerythrin(R-PE)andmouseantihumna CIM monoclonalnatibodywaspreparedasa reagentindetectionproceduresbyflowe~ometry inthisstudy．R—PEWas activatedbyhetembifunctionalreagentSPDP， thenconjugatedtonati-CIMMcAbwhichwasactivatedwithSMCC．TheconjugateWaspurifiedbySephaerylS-300HRgel filtration．CIMexpressionfromheMthysubjectsWasdetectedbyusingprocedureinfloweytome—try．Theexperimentsshow htattheR-PEconjugateisausefulfluores-centreagentforanalysisCD4onhmunaperipheralbloodlymphocytes． Keywords：R-phycoerythrin(R-PE)；MousenatihumanCIMmonoclonalnatibody CD4T淋巴细胞又称T辅助细胞，它的计数 和比值的测定 (正常成年人 的绝对值 500—1600／mm ，相对值 标记抗体所用 的荧光素一般为 FITC，R．PE， 35％一50％ ，与CD8T淋巴细胞又称T抑制细胞 APC，PerCP，PE—CY等。R．PE是海洋藻类中呈红橙 的比值 1．5～1．7：1)，可以在一定程度上反映人体 色的一种水溶性捕光作用色素，是近年发现的用于 的免疫机能。同时，CD4T淋巴细胞又是HIV的主 免疫荧光分析和标记各类配体的一种新型荧光染 要靶细胞，HIV感染者可以导致机体内CD4T淋巴 料。R-PE的分子量为 240kD，激发波长 490— 细胞的丢失，其相对值下降，绝对数量减少，而 560nm，发射波长595nm，其激发波长和发射波长不 CD8T淋巴细胞数量增加，导致 CD4和CD8的比 同，可以使它易于与FITC及内源性荧光分子相区 例失调。因此CD4T淋巴细胞计数和CD4／CD8比 别，并且能够在同一激发波长下，与其他荧光素同时 值的测定，无论是对机体免疫功能的评估，还是