苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba 结构域Ⅱ中Loops 结构与功能.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, September 25; 24(9): 1631-1636 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究简报 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba 结构域Ⅱ中 Loops 结构与功能关系研究 1 1 1 1 昉 2 王广君 , 张杰 , 孙东辉 , 宋福平 , 黄大 1 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193 2 中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081 摘 要: 为了明确杀虫晶体蛋白中各个Loop 的结构与功能的关系, 以及Loop 突变对Cry1Ba 蛋白杀虫活性的影响, 首 先通过三维结构模拟以及同源序列分析的方法, 找到Cry1Ba 蛋白三个结构域及三个Loop 相对应的氨基酸片段; 然后通 过重叠引物 PCR 将编码 Cry1Ba 蛋白结构域Ⅱ中的三个 Loop 进行了相应的突变, 共获得了 5 个突变体 M1 (Loop1: 340WSNTR344 —缺失(Cry1A)) 、M2 (Loop2: 402Y —G) 、M3 (Loop2: 400GIYLEP405 —PSAV (Cry3A)) 、M4 (400GIYLEPIH407—ILGS(Cry1A)) 、M5 (Loop3: 472LQSRV476 —AGAVYTL (Cry1A)) 。将这些突变体在大肠杆菌BL21 中进行了诱导表达, 提取蛋白, 分别对小菜蛾进行了生物活性测定。生测结果表明, Loop1 的缺失突变 M1 的毒力, 与 Cry1Ba (LC50 0.96 μg/mL)相比, 显著降低, LC50 为35.51 μg/mL; 在Loop2 的突变中, 单个氨基酸的突变M2 (Y/G)的毒力略有 下降 (LC50 为1.31 μg/mL); 而另两种突变 (M3 和M4)对小菜蛾的毒力明显下降, LC50 值分别为 11.56 μg/mL 、34.81 μg/mL; Loop3 的突变M5 对小菜蛾的毒力略有提高 (LC50 0.81 μg/mL), 但差异不显著。对Cry1Ba 蛋白突变前后结构与功能之 间关系的分析结果表明, Loop 区突变对Cry1Ba 蛋白的结构和功能影响非常显著; Loop1 和Loop2 在决定Cry1Ba 对小菜 蛾的毒性方面起着重要作用。 关键词: 苏云金芽胞杆菌, Cry1Ba, Loop, 基因突变 Relationship between Structure and Function of Loops from Bacillus thuringiensis Insecticidal Crystal Protein Cry1Ba 1 1 1