基因工程原理-第3章基因克隆载体概要1.ppt

基因工程原理 Principle of Gene Engineering 第三章 基因克隆载体 针对受体细胞的可转移性 自主复制功能：ori 显著的筛选标记：抗药性或显色 特定的多克隆位点：RE位点 安全性：不含对受体有害基因、不任意转入其它细胞尤其是人体细胞 一、细菌质粒载体 ——宿主细胞染色体外裸露的双链DNA分子。 2. 质粒DNA分子大小 3. 质粒的复制 质粒DNA复制：单向复制，受宿主细胞和质粒遗传系统双重控制，不会无限制复制。 ——在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳定地共存，这一现象叫质粒不亲和性。 接合型质粒：含有tra基因的质粒。F质粒 非接合型质粒：不含tra基因的质粒。ColE1 显性质粒：能使宿主细胞表现出质粒所携带的性状。 如： 隐蔽质粒：不会赋予宿主细胞新性状的质粒为隐性质粒。 （二） 构建质粒克隆载体的策略 （三） 质粒载体的构建 选择合适的出发质粒：ori，选择标记、克隆位点、启动子、终止子…… 正确获得构建质粒载体的元件 组装合适的选择标记基因 选用合适的启动子 构建过程简单 pBR322质粒的结构特征： 大小：4363bp 具有ColE1拷贝复制子 选择标记：Amp，Tet 24种限制性核酸内切酶单一位点 BamHI等导致Tet插入失活