第二节动物细胞工程研究.pptVIP

化学性质单一、特异性强的抗体 1. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ 2.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） 　 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细 谢谢指导！ 单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形 成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生 的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克 隆抗体。 筛选培养基得到的专一阳性克隆需再次克隆的原因：　　可以简单理解为：　　1.可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞　 2.刚融合的细胞不稳定　　　　一般再经三次克隆选择后，才能达到100%阳性克隆。　　细解做法为：　　第一次筛选培养（HAT）：去除无关细胞，得到杂交瘤细胞。将融合的细胞悬浮于HAT培养基中，加入到96孔板内，根据情况2-3天换液一次，每次吸去二分之一到三分之二培养液，再加入等量新鲜培养液。7-14天改用HT培养液，14天以后用普通的RPMI1640完全培养液。因为杂交瘤数量很少，多半不易存活，所以通常要加入饲养细胞才能使其繁殖，常用小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞。能释放某些生长刺激因子，并能满足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。 （有的死，有的活，活的有些可以用单一抗体检验阳性，但阳性孔可能由1~多个细胞克隆得到）　　第二次筛选：初筛阳性克隆可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞，且刚融合的细胞不稳定，故应尽早进行克隆。克隆后的细胞集团生物学特性完全相同。（将其单个分开）融合后的杂交瘤细胞要经过三次克隆化才能达到100%的阳性克隆。常用方法：有限稀释法和软琼脂法。有限稀释法，把杂交瘤细胞悬液稀释后，加入到96孔板中，理论上每孔一个细胞，第一次克隆化时用HT培养液，以后的克隆化可以用不含HT的RPMI1640培养液。也要加入饲养细胞。软琼脂法，在培养液中加入0.5%左右的琼脂糖凝胶，细胞分裂后形成小球样团块，由于培养基是半固体的，可用毛细管将小球吸出，团块经打碎后，移入96孔板继续培养。 　　资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 骨髓瘤细胞 * 商丘一高：刘东 1.概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 2、动物细胞融合基本原理： 与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性 3、诱导方式 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激、振动、离心 聚乙二醇（PEG） （丧失感染性、保留抗原结构） 动物细胞融合过程示意图 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 有丝分裂 两个完整的杂交细胞 提 问 ？ 1.抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞（浆细胞） 2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 3.某一动物体内，由机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。 4. 简述获得抗体的传统途径？ 抗原 动物体 抗体 抗原不纯 抗体不纯 刺激 浆细胞 6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？ 5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 产量低，纯度低，特异性差 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 注射特定抗原蛋白 单克隆抗体制备过程示意图 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 单克隆抗体制备过程示意图 多种杂交细胞 选择培养基上培养 专一抗体检