转染Cx43cDNA对脑胶质瘤C6细胞增殖及侵袭性的影响及其与ERKp38MAPK信号通路的关系.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 将 pCMV-Cx43cDNA 重组质粒转染入大鼠脑胶质瘤 C6 细胞，上调 C6 细胞 Cx43 表达，探讨C6 细胞过表达Cx43 对其增殖和侵袭性的影响及ERK/p38MAPK 信号通路的调节。 方法： 通过脂质体将 pCMV-Cx43cDNA 重组质粒转染入 C6 细胞，使 C6 细胞过表 达 Cx43，并用 G418 抗性筛选出稳定过表达 Cx43 的 C6 细胞，用 Western blot 检测 Cx43 蛋白表达；实验分为 C6 组、C6-non 组（转染空载体）、C6-Cx43 组 （转染Cx43 ），测定各组细胞倍增时间和软琼脂集落形成实验比较各组细胞集落 数。 分别用 ERK1/2 特异性阻断剂 PD98059 、p38MAPK 特异性阻断剂 SB20219 处理细胞，MTT 比色法检测各组细胞活性；建立体外 Transwell 侵袭模型联合 MTT 法，观察过表达 Cx43 对 C6 细胞侵袭能力的影响；Western blot 检测各组 细胞 Cx43、p-Cx43 、p-ERK1/2 、p-p38 和 P16 蛋白表达。 结果： 成功将 pCMV-Cx43cDNA 重组质粒转入 C6 细胞，并用 G418 筛选得到稳定 转染 Cx43 基因的细胞株。C6-Cx43 细胞 Cx43 蛋白表达量明显增加（P ＜0.01 ）； C6-Cx43 组比 C6 组、C6-non 组细胞增殖速度明显减慢，细胞集落数明显减少 （P ＜0.01 ）。 MTT 比色法、Transwell 侵袭模型联合 MTT 法显示 C6-Cx43 组比 C6 组、 C6-non 组细胞存活率明显降低，侵袭能力明显增强（ P ＜ 0.01 ）； C6-Cx43+PD98059 组、C6-Cx43+SB202190 组较 C6-Cx43 组细胞存明显活率降 低，侵袭能力明显增强（P ＜0.05 ）。 Western blot 显示：C6-Cx43 组比 C6 组、C6-non 组 Cx43 蛋白表达显著增多， p-Cx43 、p-ERK1/2 、p-p38MAPK 蛋白表达明显减少（P ＜0.01 ）；C6-Cx43 +PD98059 组、C6-Cx43+SB202190 组比 C6-Cx43 组 p-Cx43 、p-ERK1/2 、 p-p38MAPK 蛋白表达显著下降（P ＜0.05 ）。 C6-Cx43 组比 C6 组、C6-non 组 P16 蛋白表达明显增加（P ＜0.01 ），提示 II 万方数据 摘要 Cx43 蛋白高表达，促进 P16 蛋白表达水平明显增加，两者呈正相关。 结论： 1. C6 细胞成功转染重组质粒 pCMV-Cx43cDNA ，C6-Cx43 细胞 Cx43 蛋白 表达明显增加，显著抑制 C6 细胞的增殖，增强 C6 细胞侵袭性，降低 p-Cx43 、 p-ERK1/2 、p-p38MAPK 蛋白的表达，并使 P16 蛋白的表达上调。 2. Cx43 蛋白可能通过 ERK/p38MAPK 途径抑制 C6 细胞的增殖，增强 C6 细胞侵袭性。 关键词：大鼠脑胶质瘤细胞C6 ；Cx43 过表达；p-Cx43 ；ERK1/2 ；p38MAPK ； 增殖；侵袭 III 万方数据