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人骨髓间充质干细胞对脑胶质瘤细胞增殖影响 　　[摘要]目的 检测人骨髓间充质干细胞（hMSCs）对脑胶质瘤细胞生长增殖的影响，评估应用hMSCs治疗人脑胶质瘤的生物安全性。方法 获取hMSC的条件培养基（hMSCs-CM）；实验组人脑胶质瘤细胞U251培养于hMSCs-CM，对照组U251细胞培养于hMSCs-CM的基础培养基；以MTT实验检测细胞增殖能力的变化。结果 MTT结果显示，与对照组比较培养于hMSCs-CM的实验组U251细胞的增殖能力明显提高，差异有统计学意义（P 　　1.2人骨髓间充质干细胞诱导分化能力的检测 将第2～5代的hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，按1×105个/cm2的密度培养于含有B27/N2（美国Gibco BRL）的无血清DMEM/F12培养液，并加入20 ng/ml的EGF和bFGF（美国Sigma），置于37℃、5%CO2培养箱中培养。培养液每周更换一次，生长因子每周添加2次。培养10～15 d后，神经球样结构可见形成。将神经球样结构的细胞以4%的甲醛固定，通过常规免疫组化的方法检测神经干细胞标志性蛋白nestin的表达。免疫组化实验所使用的抗体及浓度为：兔抗人nestin，1∶500（美国Chemicon International）和山羊抗兔IgG Cy3，1∶100（美国Chemicon International）。细胞核以DAPI染色 1.3人骨髓间充质干细胞的条件培养基（hMSCs-CM）的制备 将hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，接种于75 cm2的培养皿，加入DMEM-F12加10%胎牛血清，培养于含5% CO2的37℃细胞培养箱，待细胞密度达70%～80%，以无血清的DMEM/F12洗涤，然后加入9 ml的DMEM/F12含0.1% BSA，培养3 d后，吸取培养液，通过离心（1000 g，5 min），并以孔径为0.22 μm的滤膜过滤，以去除细胞，获得hMSCs-CM。将基础培养基（DMEM/F12含0.1% BSA）作为实验的对照培养基（control medium） 1.4 MTT实验检测hMSCs-CM对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响 将对数期U251细胞以1×103个/孔接种于96 孔板，正常培养24 h后，吸除原培养基，以无血清的DMEM/F12洗涤后，实验组加入200 μl hMSCs-CM，对照组加入200 μl对照培养基（control medium），每组设12个复孔。培养24 h后予换液，继续培养至48 h后，于每孔加入5 μg/ml MTT溶液20 μl，以37℃孵育4 h后，将上清液全部弃去，每孔加入二甲亚砜（DMSO）溶液200 μl，溶解紫色结晶沉淀，振荡10 min，用酶标仪在570 nm处测定其光密度（OD值）。实验重复3次 1.5统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料组间比较采用t检验，以P 　　[2]范存刚，张庆俊.骨髓间充质干细胞对脑胶质瘤的趋瘤效应[J].中国组织工程研究，2012，16（36）：6815-6819. [3]Jung JH，Kim AA，Chang DY，et al.Three-dimensional assessment of bystander effects of mesenchymal stem cells carrying a cytosine deaminase gene on glioma cells[J].Am J Cancer Res，2015，5（9）：2686-2696. [4]Guo XR，Yang ZS，Tang XJ，et al.The application of mRNA-based gene transfer in mesenchymal stem cell-mediated cytotoxicity of glioma cells[J].Oncotarget，2016，7（34）：55529-55542. [5]Guo XR，Hu QY，Yuan YH，et al.PTEN-mRNA engineered mesenchymal stem cell-mediated cytotoxic effects on U251 glioma cells[J].Oncol Lett，2016，11（4）：2733-2740. [6]Zhu R，Xu R，Jiang X，et al.Expression profile of cancer-related genes in human adult bone marrow-derived neural steml