4 活体染色.pptVIP

实验四 活体染色 * * 【实验目的】 1. 掌握活体染色基本原理和方法。 2. 观察动物细胞内两种重要细胞器。 【实验材料】 牛蛙的软骨和肝细胞。 【实验仪器及染色液】 显微镜，载玻片，盖玻片，解剖针，手术剪，香柏油， 中性红溶液，占纳斯绿（B）溶液等。 【实验原理】 占那斯绿之所以能够活染线粒体，是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持在氧化状态（即有色状态），而在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。 中性红是碱性染料，它是无毒性的活体染料之一，它的色根位于阳离子上，在酸性环境内起电离作用。阳离子即为带红色的组成部分，细胞活染时，染料透过质膜而进入细胞质内，活细胞的液泡PH7, 这样，中性红就会在液泡内电离，经电吸附的积累后，液泡显红色，由于细胞核与细胞质的PH大于等于7，所以不被中性红染色。 【实验步骤】 （一） 占纳斯绿活染线粒体 1、牛蛙一只，取出其肝脏置于盛有含0.64%NaCl 的Ringer溶液平皿内。 2、将肝剪成小块，放在另一干净平皿内，加占纳斯绿液，注意:不可将所有组织块全部淹没在溶液内，最好使组织有一点裸露在染液的外面，这样细胞内线粒体的酶系可充分氧化，线粒体易染色。 3、染色30min以上，用两根解剖针将肝组织分离，使一些细胞和细胞群离析出来。 4、用吸管轻轻吸取一些离散的细胞，放在清洁的载玻片上，盖上盖玻片，光镜下观察。 5、观察结果，可见肝细胞内线粒体被染成蓝色， 呈颗粒状或线条状，分布在核周围的特别多。 （二）中性红活染液泡系 1、解剖牛蛙，取胸突软骨，置于盛有含0.64% NaCl的Ringer溶液的平皿中。 2、将胸突软骨前端最薄的部分剪成数小块，置于 另一平皿内，加中性红染液，染色10-15min。 3、在干净载玻片上滴一滴含0.64%NaCl的Ringer 溶液，将染好的小块软骨放上，盖上盖玻片， 在光镜下观察。 4、观察结果，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核部分 不被染色，细胞核轮廓清晰可见，在核的一侧 有许多被染成红色的大小液泡组成的一个特别区域 叫液泡系。 【作业】 分别绘图示细胞中线粒体和液泡系的形态和分布。