实验二、活体染色.pptVIP

实验二、超活染色 超活染色（体外活染）：从生物体取出的活着状态的细胞和生活在适当溶液中的细胞的染色，称为超活染色。 活体染色常用染料 詹纳绿－线粒体（体外活染） 亮焦油紫－线粒体（体内活染） 中性红－液泡系（体内体外兼可） 次甲蓝－神经组织 尼罗蓝（Nile Blue）－原生动物大核 实验目的 了解常用活体染色剂及使用方法 通过活体染色了解细胞的结构和功能 实验原理 用无毒或毒性很小的染料对活细胞、组织或器官进行染色，可以在保持细胞活性的前提下显示活细胞内的特定结构。 中性红（neutral red）：将液泡系染成红色，染色与液泡酸碱性有关，酸性中呈红色，碱性中呈黄色 ； 詹纳绿（Jenus green）：将线粒体染成蓝绿色，原理是线粒体细胞色素氧化酶可使染料保持氧化状态而呈蓝绿色。 液泡系 由膜包裹的小泡和液泡，细胞内除线粒体外都属于液泡系。 实验材料 观察线粒体：口腔粘膜上皮细胞合青菜叶 观察液泡：草履虫 实验试剂 0.04％中性红生理盐水溶液：先配成1%中性红水溶液，0.65％氯化钠溶液将1%中性红水溶液稀释成0.04%溶液，分装到8个棕色滴瓶，放在黑暗处。 0.02％詹纳绿生理盐水液：先配成1%中性红水溶液，0.90％氯化钠将1%詹纳绿水溶液稀释成0.02%溶液，分装到8个棕色滴瓶，放在黑暗处。 实验仪器用品 普通光学显微镜 小剪刀 圆头牙签 载玻片与盖玻片 胶头吸管 实验操作 （一）口腔粘膜上皮细胞詹纳绿染色 1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱），滴2滴0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、用牙签钝头在自己口腔脸颊粘膜处用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液中搅匀； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察口腔粘膜上皮细胞及其中染成蓝绿色的线粒体，画图示线粒体形态及分布 （二）植物叶肉细胞线粒体染色及观查 1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱），滴2滴0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、撕取小片植物叶下表皮，放入染液中压实； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察叶肉细胞中线粒体的形态、大小及分布 肝组织詹纳绿染色及肝细胞线粒体观察 1、剪取肝边缘较薄处组织1小块，放在凹玻片凹槽中，用生理盐水反复浸泡冲洗以除去血液； 2、将凹玻片放在37℃恒温葙（为什么？），滴2滴1/5000健那绿生理盐水液，注意不可将组织完全淹没，使组织边缘染成蓝绿色即可，一般需20－30min； 3、在另一载玻片上滴加一滴生理盐水，用解剖剪剪取组织块边缘着色部位，放入生理盐水中，剪碎后压片观察，画图示肝细胞及其中线粒体形态、分布。 （三）草履虫食物泡中性红染色－观察草履虫的消化食物过程 1、用吸管吸1滴含有草履虫的培养液放在载玻片上； 2、滴加1滴0.04％中性红生理盐水溶液，水平晃动载玻片混匀液体； 3、加少量擦镜纸纤维于液滴中 4、盖上盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、标本置显微镜下观查染色过程 食物泡的形成、运动及颜色变化 活染注意问题 1、染料使用浓度： 中性红体外一般1/1000－1/3000，动物注射可达1％－2％ 健纳绿：1/3000－1/5000 2、配染液用溶剂 尽量接近观察材料生活环境的液体 * * *