三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细胞和星状细胞的比较.pdfVIP

一 220一 现代消化及介入诊疗 2007年 第 12卷 第4期 Modem DigestionIntervention 2007。Vo1．12．No．4 · 论 著· 三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细 胞和星状细胞的比较 成家茂 潘志恒 谢 瑶s 何宏文s 何义华 【摘要】目的 比较淋巴细胞分离液(LS)、Percoll液(PS)和Nycodenz液(NS)同步分离培养大鼠肝 枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC)的优缺点。方法 ①采用链酶蛋白酶E、胶原酶Ⅳ联合原位灌流消化，分 别以Ls、PS和NS的非连续密度梯度离心法同步分离培养大鼠KC和HSC。②碳素墨汁吞噬试验鉴定 KC；d—SMA免疫细胞化学染色法鉴定HSC。③倒置相差显微镜下观测细胞形态，台盼蓝染色显示细胞 活性，计数后计算细胞的得率、存活率和纯度。结果 体外成功地同步分离培养了KC和HSC；培养的KC 吞噬功能明显，而传代HSC d—SMA免疫细胞化学染色阳性者几乎达100％：采用PS或NS体外同步分 离KC的细胞得率和纯度均显著高于采