专题5 DNA和蛋白质技术概要1.pptx

专题五 DNA和蛋白质技术;课题1 DNA的粗提取与鉴定;一、提取DNA的方法;（1）利用DNA的溶解性 ? DNA的溶解度; ? DNA不_______酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则_______酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。; ①蛋白酶能水解蛋白质，但对________没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受____________的高温，而 DNA在80℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解__________，但对________没 有影响。; （3）DNA的鉴定： DNA在沸水浴的条件下，遇________反应会 呈现________;二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计;(1)先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅 拌，过滤后收集滤液即可;（三）去除滤液中的杂质;讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？;（四） DNA的析出与鉴定;A:2mol/L 的NaCl溶液5ml + DNA丝状物 + 二苯胺试剂4ml B:2mol/L 的NaCl溶液5ml + 二苯胺试剂4ml 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色;以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取;2、实验原理;实验材料和用具;;答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中;答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色;答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，六次搅拌”;②三次过滤;?六次搅拌：; 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备; 本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质;课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片断;DNA分子的结构;3.DNA分子的双螺旋结构;4.DNA的复制;参与的组分;一、PCR技术; （1） 3′端和5′端：为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基（—OH）末端称为________，而含____________的末端称为________；一个双链DNA分子中含两个3′端和两个5′端，如果一条链的方向是________，则另一条链的方向就是________，这就是反向平行的含义。;（2） DNA分子中相邻两个脱氧核苷酸残基通过 ________________相连，该化学键是由一分子脱氧核苷 酸中3号碳原子上的羟基（—OH），与相邻的另一分子脱氧核苷酸中5号碳原子上的磷酸基团脱水聚合而成。所以DNA的合成方向总是从子链的________向________延伸。;;2、PCR技术原理 （1）PCR： DNA分子在一定条件下可以进行 ________复制。 ;二、PCR的反应过程;靶序列;靶序列;靶序列;靶序列;3、结果（P60页图5-9复制结果） ;;1、PCR仪;2、微量离心管;1.准备;将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。;PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：;（一）、理论上DNA扩增数目的计算;以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。;;比色杯;课题3 血红蛋白的提取和分离;一、分离蛋白质的基本方法原理;相对分子质量; 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 ;2、 缓冲溶液的作用和组成：;思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？;在同一电场下，由于各种分子带电性质（正电荷或负电荷）的差异及分子本身大小、形状的不同，而使带电粒子产生不同??迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。;（3）常见方法;二 、粗提取血红蛋白;(1)目的：去除__________; ④生理盐水洗涤：向盛有暗红色红细胞液体的烧杯中加入五倍体积的生理盐水，缓缓搅拌10min ;（1）方法：加_________到原血液体积，再加40％体 积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟。;3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min ，试管中的溶液分为4层:;; ;三、纯化蛋白质;③顶塞的制作：;2、凝胶色谱柱的装填;3、样品加入与洗脱;b、加透析样品;①调整缓冲液面：与凝胶面平齐 ②滴加透析样品：用吸管将1ml透析液的样品加到色谱柱的顶端 ③样