零污染养猪基质垫料大肠杆菌的分布及其毒性基因检测 - yzxzcom.DOC

微生物发酵床对猪舍大肠杆菌病原生物防治作用的研究 郑雪芳1，刘波1(，蓝江林1，苏明星1， 卢舒娴1，朱昌雄2（1、福建省农业科学院农业生物资源研究所，福州 350003；2、中国农业科学院环境与可可持续发展研究所，北京 100081） 摘要：【目的】通过调查微生物发酵床养猪基质垫层大肠杆菌及毒素基因的数量分布变化动态，分析微生物发酵床对猪舍大肠杆菌的生物防治作用。【方法】分离不同使用时间、不同层次基质垫层的大肠杆菌，利用PCR扩增UdiA基因来鉴定检测大肠杆菌，并对大肠杆菌12种毒素基因进行多重PCR检测。构建大肠杆菌种群分布的动态模型，分析微生物发酵床对大肠杆菌病原的生防效果。【结果】从不同使用时间不同层次基质垫层分离鉴定出大肠杆菌419株，从这些菌株中检测出59株携带毒素基因8种其中1个月基质垫层的毒素基因阳性检出率最高，为22.47%，其次是7个月基质垫料，为16.5%，最低的是9个月基质垫料，为4.23%。大肠杆菌在微生物发酵床基质垫层种群数量时间变化规律为：随着使用时间增加种群数量逐步减少；种群数量空间变化规律为：表层（第1层0~10cm） 和底层（第4层60~70cm）分布量最大，第2层（20~30cm）分布量最少。大肠杆菌毒素基因的分布规律与之类似。从构建的大肠杆菌种群分布动态模型可以看出，基质垫层第1层（y=169.67x-1.0137）和第3层（y=313.11x-2.1885）大肠杆菌种群数量随使用时间呈指数线性方程分布第2层（y=0.1006x3-2.3733x2+16.094x-22.454）和第4层（y=0.3159 x3+6.0913x2-35.634x+79.513）大肠杆菌种群数量随使用时间呈一元三次方程分布，基质垫层能明显抑制大肠杆菌的生长基质垫层使用后期（第9个月）比使用初期（第1个月）大肠杆菌种群数量明显减少，降低幅度在67.45%~96.53%，说明微生物发酵床对猪舍大肠杆菌能起到显著的生物防治作用。【结论】微生物发酵床能抑制大肠杆菌特别是携带毒素基因大肠杆菌的生长，对大肠杆菌的生防效果随使用时间的延长而增加。 关键词：微生物；发酵床养猪；生物防治；大肠杆菌；毒素基因 Study on the biocontrol effects of microbial-fermentation bed on the pig pathogen Escherichia coli in the piggery ZHENG Xuefang1, LIU Bo1*, LAN Jianglin1,SHU Mingxing1, LU Shuxian1, ZHU Changxiong2, GUAN Xiong3 (Agricultural Bio-Resources Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fujian Fuzhou 350003; 2. Institute of Environment and Sustainable Development in Agriculture, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 3. Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Ministry of Education, Fuzhou 350002) Abstract: 【Objective】 The present paper dealt with the distribution of Escherichia coli and it’s virulent genes in the stroma cushion of piggery to explain the biocontrol effects of microbial-fermentation bed on the pig pathogen E. coli.【Method】The bacterium, E. coli isolated from in the stroma cushion of piggery in the different pig raising periods was analyzed by the method of eosin methylene blue (EMB) medium. The PCR detection was to conform the species of E. coli by amplifying