真核细胞的RNA聚合酶.PPT

定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制 半保留复制的实验证据:1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。 2. 生物中的DNA聚合酶 在大肠杆菌中发现有三种DNA聚合酶： DNA聚合酶Ⅰ 单体酶,多肽链内含一个锌原子, 多功能酶。它具有5?? 3 ?聚合酶功能（对脱氧核苷酸的选择）； 3’ ? 5’外切酶活性（对双链无作用，校对功能。但在正常聚合条件下，此活性不能作用于生长链）及5’ ? 3’外切酶活性（双链有效，主要是对DNA损伤的修复，以及在DNA复制时RNA引物切除及其空隙的填补） 在真核细胞内有五种DNA聚合酶 （与细菌DNA聚合酶的性质基本相同：底物、模板、引物、方向） α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3’-5’ 外切 - - + + + 酶活性 功能 真核细胞有五种DNA聚合酶 DNA连接酶（1967年发现）： 若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5’-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来。 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接。作用是松解负超螺旋，反应不需要能量。主要集中在活性转录区，同转录有关。 其它蛋白因子： 3.DNA的合成方式 DNA的复制：以DNA为模板 合成DNA。 逆转录：以RNA为模板合成DNA。 修复合成（DNA聚合酶I、 连接酶等） 4. DNA的复制过程：（以大肠杆菌为例） 双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 冈崎片段 在DNA复制过程中，领头链能连续合成，而随后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段以其发现者的名字命名为冈崎片段。 冈崎片段真核生物中100-200个核苷酸（核小体的DNA单位）。原核生物中1000-2000个核苷酸（相当于一个顺反子）。 5. 真核生物中DNA的复制特点 1、真核生物染色体有多个复制起点，多复制眼，呈双向复制，多复制子。 2、冈崎片段长约200bp. 3、真核生物DNA复制速度比原核慢。 定义:以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA称为逆转录，由逆转录酶催化进行。 用特异抑制物（放线菌素D）能抑制致癌RNA病毒的复制，而对一般RNA病毒的复制无影响。已知放线菌素D专门抑制以DNA为模板的反应，可见致癌RNA病毒的复制过程必然涉及到DNA。 DNA的损伤： DNA在复制时产生错配、病毒基因整合；某些物化因子如紫外光、电离辐射和化学诱变等，破坏DNA的双螺旋结构。从而影响DNA的复制，并使DNA的转录和翻译也跟着变化，因而表现出异常的特征（生物突变）。 光复活 400nm左右的光激活光复活酶，专一分解紫外光照射引起的同一条链上TT（CC CT）二聚体。（包括从单细胞生物到鸟类，而高等哺乳动物无） 二、. RNA的生物合成 1. 概念 转录：以DNA的一条链为模板在RNA聚合酶催化下，按照碱基配对原则，合成一条与DNA链的一定区段互补的RNA链的过程称为转录。 以四种核糖核苷三磷酸酸（NTP）为底物，形成3?、5? -磷酸二酯键相连接。 2. RNA聚合酶：大肠杆菌的RNA聚合酶 全酶由5种亚基α2ββ’?σ 组成，σ因子与其它部分的结合不是十分紧密，它易于与β’βα2分离，没有σ、 ?亚基的酶称为核心酶——只催化链的延长，对起始无作用。 大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的功能 3. RNA的转录过程：（以大肠杆菌为例） 起始位点的识别 转录起始 链的延伸 转录终止 有些终止子的作用可被特异的因子所阻止，使酶得以越过终止子继续转录，称为通读（ readthrough） 能够引起抗终止作用的蛋白质称为抗终止因子（antitermination factors） 4. RNA的转录后加工 在细胞内，由RNA聚合酶合成的原初转录物（primary transcript）往往需要一系列的变化，包括链的裂解、5?和3?末端的切除和特殊结构的形成、核苷的修饰、以及拼接和编辑等过程，才转变为成熟的RNA分子。此过