固氮螺菌对小麦根及根际土壤的影响.pptVIP

不同土壤水分条件下小麦根和根际土壤中分离的固氮螺菌菌株 文章结构 摘要 引言 材料方法 数据分析 结果 讨论 结论 摘 要 本研究中涉及在大田和盆栽实验中不同水分条件下从小麦根部和根际土壤分离的固氮螺菌菌株的分离和鉴定。 在灌溉地块和浇水较好的盆栽小麦根部和根际土壤中分离的固氮螺菌菌株的生存能力要比干旱和半干旱的地块或水分胁迫的盆栽的小麦根和根际土壤中的固氮螺菌菌株的生存能力高。 在水分胁迫植株中分离的菌株接种小麦在干旱环境有忍耐性。 引 言 固氮螺菌在全球范围的各种土壤条件和环境改善植物生长和作物产量被认为是很重要的硅藻目细菌菌属。 固氮螺菌植物的联合伴随着根部的生化变化，反过来又可以导致植物的生长和耐受湿度低的土壤。 固氮螺菌接种的小麦植株能在低水分土壤生长，可以缓解水分紧张的状况 调查目的 从不同水分状况农业生态区的固氮螺菌菌株的分离和鉴定 确定在固氮螺菌中分离的基因型的差异 评估固氮螺菌菌株中分离的植物激素。 选择的菌株可以成功地被用于作为承受水分胁迫的小麦的孕育剂。 材料和方法 小麦根际土壤和根的收集 固氮螺菌的分离和鉴定 激素获得与评估 DNA提取 小麦根际土壤和根的收集 不同水分条件的大田小麦根际土壤和根的收集 盆栽实验小麦根际土壤和根的收集 不同水分条件的大田小麦根际土壤和根的收集 从干旱的阿托克、半干旱地区的Kallar Sayedan、以伊斯兰堡作为控制中心的国家农业研究灌溉区收集的根际土壤和根 采样时期为小麦营养生长阶段（分蘖期），生殖生长阶段（开花期）。 在采样过程中，选五个完整的植物以及它们的根。仔细洗涤除去根上附着的土壤颗粒。 盆栽实验根际土壤和根的收集 采用完全随机区组排列 种子用0.1％HgCl2进行表面消毒 土壤类型为砂质粘壤土 每盆种四棵植物 通过在七天中两个阶段的控水来造成其水分胁迫。被控制的植物根据需要喷洒蒸馏水。在水分胁迫其间用塑料遮住植物防止雨水。经过7天的处理。 收获植物，并把根和根际土壤收集并4°C储藏 固氮螺菌的分离和鉴定 根际土壤十倍稀释液制备：把10克的根际土壤悬浮液放入90克灭菌的蒸馏水中制备 接种在无氮培养基中在30°C培养48小时 用LB平板获得纯净的固氮螺菌菌落 菌株在琼脂平板上经过24小时的培养。观察菌落颜色和形态。 根据MacFaddin的方法使用QTS24微型识别系统，进行生理生化测试。 激素获得与评估 分离的细菌菌株采用纯培养方法获得ABA，IAA，GA 固氮螺菌菌株在NF液体培养基上培养 在培养基上接种1 - 日龄细菌培养并放置在100转振荡器上培养7天 离心培养物（6,000×g下）15分钟，上清液用于萃取生长激素 上清液的pH值用1 N HCl调节至2.8。 植物激素，用等体积的乙酸乙酯和乙酸盐萃取 此乙酸乙酯萃取液在35℃下蒸发至干，将残余物溶解于1,500μl的纯甲醇中 对样品进行分析在HPLC上用UV检测器 DNA提取 收集1.5ml的7000转3分钟离心的饱和培养液 将细胞在200μl的裂解缓冲液中悬浮并裂解 以除去蛋白质和细胞碎片，加入65μl的5M NaCl溶液并混合均匀 粘稠的混合物在4℃下进行离心10分钟 上层清液转存在一个新的小瓶中，加入等体积的氯仿，有乳白色溶液形成时轻轻地反转试管的至少50次。离心（7000×克）3分钟 所提取的上清液转移到另一小瓶中，用100％EtOH中沉淀DNA，用70％EtOH洗涤两次，并再溶解于50μl的高压灭菌冷水 数据分析 计算至少五个重复数据的平均值和标准偏差。数据进行统计分析，方差分析和比较，Duncan’s的多个范围分析 结果 固氮螺菌分离株的生存效率（logCFU/ g） 固氮螺菌分离株的分离和生化鉴定 通过分子生物学技术的鉴定 激素的评估 在水分胁迫下普通小麦幼苗接种固氮螺菌引起的影响 通过16S rRNA基因序列分析鉴定固氮螺菌分离株 固氮螺菌分离株的生存效率（logCFU/ g） 伊斯兰堡NARC灌溉区分离的菌株的生存效率值高从干旱和半干旱场区植物根和根际土壤中分离的菌株。类似的模式在分离盆栽试验被观察到，在植物受到不同程度的水分胁迫。（图1） 与分蘖期相比在植物开花期含水量低的土壤影响集落的形成更为明显，不论大田还是盆栽。在分蘖期，控制水分观察菌落数有18-29％的跌幅，而在开花期，相应减少土壤水分8％，菌落总数下降了26-38％。 固氮螺菌分离株的分离和生化鉴定 根据碳/氮利用的基础将从大田条件下分离的固氮螺菌菌株分为三组 第一组包括NARC干旱地区植物分蘖和开花期根和根际土壤中分离的菌株，并且命名为WRA1, WSA1, WRA4, 和WSA 4 第二组包括8％土壤水分地区植物分蘖和开花期