神经元单层细胞电镜原位包埋方法的探讨.PDFVIP

网络出版时间：2016-12-20 16:07:56 网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1607.008.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2016, 38(12): DOI: 10.11844/cj cb.2016.12.0227 技术与方法 神经元单层细胞电镜原位包埋方法的探讨 潘立君 何 苗 张 宾 张 芳 吴亮亮 孔 妤* ( 中国科学院上海生命科学院神经科学研究所, 神经科学国家重点实验室, 电镜技术平台, 上海200031) 摘要 为探究神经元单层细胞电镜原位包埋方法, 该研究以体外培养的大鼠皮层神经元单 层细胞为材料, 采用了三种不同的方法进行样品制备。结果表明, 常规悬浮离心包埋法容易对细胞 造成机械损伤, 且无法保持原位性; 培养在玻璃盖玻片上的细胞, 虽能保持较好的原位性, 但其超 薄切片表层易破碎, 遇水溶解, 且在透射电镜下可见细胞整体衬度弱和超微结构不完整; 而培养在 Thermanox塑料薄膜盖玻片上的细胞, 可容易观察到相邻细胞间的紧密连接, 超微结构清晰, 衬度较 前组样品好, 三维重构之后可很好地显示神经元细胞之间的毗邻关系。因此, 相比前两种细胞制样 方式, Thermanox塑料薄膜上单层细胞处理过程简便, 成功率高。该结果为神经元细胞超微结构的 形态学研究进一步提供技术新思路, 并有望推动神经元细胞超微结构观察中三维重构技术和光镜/ 电镜联用技术的开发应用。 关键词 神经元单层细胞; 原位包埋; 塑料薄膜盖玻片; 电镜三维重构 Study on the Methods of In Situ Embedding Monolayer Cultured Neurons for Electron Microscopy Pan Lijun, He Miao, Zhang Bin, Zhang Fang, Wu Liangliang, Kong Yu* (Institute of Neuroscience, State Key Laboratory of Neuroscience, Shanghai Institutes for Biological Science, Chinese Academy of Science, Shanghai 200031, China) Abstract To investigate an optimized in situ embedding method of monolayer cultured neurons, the rat cortical neuronal cells were used as the experimental samples to be embedded in resin by three methods, respectively. The results showed that the conventional cell suspension-centrifugation sample preparation was easy to cause mechanical damage and hard to remain cells in situ. The cells cultured on the glass coverslips kept their original posi