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提取和定量分析20071016 -质粒DNA
QA; 1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10 11 12;相邻泳道溢出污染;边缘效应？;！;胶融！外溢;质粒DNA的提取 及其定性定量分析;主要内容;基本原理;碱裂解Ⅱ
碱变性;?
加入200uL溶液III（轻轻混匀!），冰上静置15min质粒DNA复性
?
12000rpm，离心10min
?
上清加等体积的酚：氯仿：异戊醇（旋涡混匀）
?
12000rpm，离心5min
?
上清加等体积的氯仿：异戊醇（旋涡混匀）
?
12000rpm，离心5min
?;上清加2倍体积的无水乙醇（旋涡混匀），室温 30min
?
12000rpm，离心10min
?
沉淀用75%乙醇1mL洗涤两次（振荡混匀、离心）
?
12000rpm，离心5min
?
沉淀于超净台中风干（5min～20min）
?
沉淀加入20uL RTE，600C水浴30分钟溶解
?
-200C保存;碱裂解Ⅰ;碱裂解Ⅱ;复性回收;制 胶：1%琼脂糖（20 mL，1xTAE)
缓冲液：1xTAE，130 mL
制 样：质粒DNA 2μL 10xloading 0.5μL
Marker：5μL
电 泳??80伏恒压
结果分析：鉴定（定性，纯度）；半定量;测定流程：质粒DNA稀释100倍（用TE缓冲液稀释），总体积300 μ L
检测波长：
定量：C=OD260*50*稀释倍数（ μg/mL ）
纯度指标：;下次实验的简介与准备;DNA 重 组－酶切和连接;预习：在实验中如何进行对照？
思考：工程菌的常用种类及用途？ 质粒的种类及特性？ 分子生物学中常用的内切酶？连接酶？ 抗生素种类？为什么应用抗生素？
灭菌：1mL、200μL、 10μL枪头各一盒 1.5mL小指管 40个;加油啊！;2000
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