miR-124对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响.docVIP

miR-124m对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响 杜善梅 医学技术学院 摘要：目的 探讨miR-124对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响。方法 用脂质体转染法将miR-124 mimics（实验组）与mimics NC（阴性对照组）转染入人乳腺癌细胞株MCF-7，通过MTT实验及Transwell试验分别检测细胞增殖和迁移能力的改变；结果 (1)MTT实验表明实验组细胞增殖能力较阴性对照组低,并具有统计学意义；(2) Transwell实验证明较阴性对照组，实验组细胞迁移明显降低，并具有统计学意义。结论 miR-124发挥抑癌基因的作用，抑制了乳腺癌MCF-7细胞的增殖及迁移。 关键词：乳腺癌；miR-124；增殖；迁移 乳腺癌是全球范围内女性最常见的癌症[1]，其严重危害着人类的生命健康和生活质量。在美国每年新增约18万例患者，死亡约4万例，是仅次于肺癌的第二位癌症死亡原因。近年来，随着我国医学发展水平的不断提高，对乳腺癌的研究已经有了较大的进步。但是，还有很多患者未能在发病早期得到准确的诊断和合理的治疗, 从而给患者造成很大的痛苦。因此，研究乳腺癌新的诊断标志物并进行积极有效的治疗显得尤为重要。 microRNA（miRNA）是指由内源性基因编码的、长度约19～25bp的小型非编码RNA。这些miRNA能够识别特定的目标mRNA，在转录后水平通过促进mRNA的降解和(或)抑制翻译过程而负调控靶基因的表达[2]，miRNA参与生命活动的一系列重要进程，包括细胞生长、发育、代谢、器官形成以及细胞的增殖、分化、凋亡等[3]。miRNA的表达异常可能导致包括肿瘤在内的多种疾病的发生。越来越多的研究表明，miRNA在多种实体癌中的表达中存在异常，它可以起到癌基因或抑癌基因的作用，参与细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等的调控，在肿瘤的发生及发展过程中发挥着重要的生物学功能[4]。 研究表明，多种miRNA在乳腺癌中也存在着表达异常，miR-10b、miR-103、miR-301等在乳腺癌中高表达，而let-7、miR-125、miR-126等在乳腺癌中低表达，已有实验证明以上两类miRNA中高表达的miRNA对乳腺癌的发生、发展起到了促进作用，低表达的miRNA对乳腺癌起到了抑制作用。miRNA-124在肝癌、宫颈癌等肿瘤组织或细胞中表达下调[5,6,7]，并对肿瘤的发展起到了抑制的作用，但目前miR-124在乳腺癌中的确切生物学功能尚不清楚。本研究通过在乳腺癌细胞中转染miR-124 mimics使miR-124高表达，探讨miR-124对乳腺癌细胞增殖的转移能力的影响，从而初步揭示miR-124在乳腺癌中的生物学功能。 1材料与方法 1.1细胞与试剂 人乳腺癌细胞株 MCF7 购自中国科学院细胞库，L-DMEM培养液、脂质体Lipofectamine 2000及RNA提取试剂（trizol）购自英潍捷基贸易有限公司公司，小牛血清购自上海吉泰生物科技有限公司，miR-124模拟体、miRNA反转录试剂盒和qRT-PCR试剂盒购自上海吉玛制药技术有限公司，MTT试剂盒购自上海拜力生物科技有限公司，Transwell小室及细胞培养瓶等耗材购自江苏泰诺源生物有限公司。 1.2细胞培养及转染 细胞采用L-DMEM，37℃，5% CO2培养。将约1×105个细胞/孔的MCF-7细胞接种于6孔板中，加含10%小牛血清的L-DMEM培养基，5%CO2，37℃培养，待细胞生长至70%-80%融合度，按说明书进行转染，实验组加入miR-124模拟体的浓度为80nM，阴性对照组按照等量的浓度进行转染。转染6h后去除转染试剂，换入正常培养基进行荧光显微镜观察转染效率并拍照（图1），继续培养24h，收集细胞备用。 图：通过荧光显微镜评估被转染的乳腺癌MCF-7细胞的转染效率。图：转染miR-124 mimics后，乳腺癌细胞中miR-124的表达上调。图：转染miR-124 mimics后，对乳腺癌细胞MCF-7的增殖起到了抑制作用，与阴性对照组相比具有统计学意义。（*：P0.05；**：P0.01）。图：转染miR-124 mimics后，对乳腺癌细胞MCF-7的迁移起到了抑制作用，与阴性对照组相比具有统计学意义。（***：P0.001）[8]。Ghanta等[9]通过自己建立的人类miRNA疾病数据库整理出几十个促癌miRNA和抑癌的miRNA，并对其功能、表达、进化、基因组分布、靶基因及转录因子等进行了全面的系统生物学分析．发现在功能上促癌的miRNA更倾向于促进细胞增殖、抑制凋亡、抑制免疫细胞发育、控制细胞周期等，而抑癌的miRNA更倾向于抑制细胞生长、促进凋亡等。 目前关于miRNA可作为癌基因或抑抑癌基因参与