基于鸡胸腺的微循环初步探讨.docVIP

基于鸡胸腺的微循环初步探讨 材料与方法 1.试验动物与仪器：取健康湛江鸡１０只，体质量（１５plusmn;０２）ｋｇ，日龄（１１０plusmn;５）ｄ。主要仪器为活体微循环观察显微镜（广州启跃光电仪器有限公司，增设底部投射光源）。 2.方法： 1）胸腺的血管观察：将鸡窒息处死，静置１ｈ，待血液在体内凝固。将颈部皮肤从腹侧正中划开，暴露胸腺，整体泡入体积分数为２０％甲醛中固定１ｄ后，血液凝固呈黑色，解剖观察颈部血管走向及供应胸腺的血管。 2）活体观察胸腺微循环状态：试验动物称质量。颈部、胸部去毛，消毒，保定，颈部中线切开皮肤，找到胸腺，将颈部皮肤固定在特制手术台上，涂以镜油，增设底部光源，在微循环观察仪下观察血管走向，血流状态等。观察过程中用３７℃林格氏液保温保湿。 3）墨汁灌注透明标本制作：灌注液：质量浓度为００５ｇ／ｍＬ的明胶墨汁（加入体积分数为２％的甲醛）。动静脉透明标本制作：活体观察结束后，在胸腔入口从颈总动脉和静脉灌入含抗凝剂的生理盐水冲洗血管，再灌入１０ｍＬ体积分数为１０％的甲醛，随后立即将灌注液缓慢并保持一定压力地灌入。灌注后结扎血管，取下胸腺，然后泡入体积分数为１０％甲醛中固定１～２ｄ。胸腺微血管透明标本制作：固定后的胸腺用体积分数为１０％的Ｈ２Ｏ２漂白１～２ｄ，光照催化，漂白后用流水洗净。使用经典的冬青油透明法透明：梯度脱水方法参照解剖学试验技术，取出标本后切成约１５０mu;ｍ的透明厚片，浸泡在冬青油中用解剖显微镜观察。 4）苏木精：－伊红染色切片制作常规ＨＥ染色。 5）图像观察及处理：从每组制得的胸腺切片中随机抽取１０张，在显微镜下于每张切片上随机选择５个视野，利用图像分析系统，测定小叶间动、静脉直径，各级毛细血管直径和微血管面积密度，前３者每个视野测定４个值，再取其平均值。 6）数据统计：分析统计结果均用ｘ珋plusmn;ＳＤ表示，各统计结果均采用ＳＰＳＳ１７０进行分析。单因素方差分析采用Ｏｎｅ?ｗａｙＡＮＯＶＡ模块，组间比较采用ＬＳＤ法。 结果与分析 1.胸腺微循环观察 1)鸡胸腺血管供应：试验观察到鸡的胸腺位于颈部气管两侧皮下，与颈浅静脉、迷走神经、迷走动脉等包在同一个筋膜鞘内。左右各７叶，共１４叶，颜色粉红（甲醛固定后颜色呈灰白）。胸腺的主要血液供应来自于迷走动脉，这是一条起自颈总动脉干的细小分支，分布至颈部内脏和颈中段的被皮，沿途再分支为胸腺供应血液。迷走动脉上升至颅底与枕动脉发出的降支吻合。流出左右两侧胸腺的静脉分别汇入左右颈静脉，在胸腔入口处与锁骨下静脉汇合成左右前腔静脉。流出胸腺的静脉，有的直接汇入颈浅静脉，有的则汇入到从皮肤收集静脉血液的分支中，再并入颈浅静脉。 2)微循环动态观察：本试验鸡的胸腺平均厚度为２６ｍｍ，通过活体微循环显微镜观察到胸腺小动脉、分支毛细血管、网状毛细血管、小静脉等（图２Ａ）。微血管管径粗细不一（图２Ｂ）。常能观察到血管的吻合支（图２Ｃ）及微血管的线流、粒流和线粒流（图２Ｄ）。细动脉分支形成毛细血管，管径细（约４～６mu;ｍ），走行长而直，形状刚健，血流快。分支毛细血管注入网状毛细血管，互相交联，走行弯曲，网状毛细血管管径较分支毛细血管粗（约５～８mu;ｍ），血流较慢，汇集入集合毛细血管。集合毛细血管管径较粗（约８～１２mu;ｍ），走行弯曲，外观柔软，途径长短不一，血流较网状毛细血管快，注入细静脉（图２Ａ，２Ｂ，２Ｅ）。 3)鸡胸腺组织结构观察：ＨＥ染色切片观察到每叶胸腺的被膜结缔组织向腺体内发出许多膈，将胸腺分隔成许多小叶，血管随其进入胸腺内。每个小叶可分为皮质和髓质（图３Ａ）。皮质浓染而髓质淡染，鸡胸腺中不易找到像哺乳动物那样典型的胸腺小体。试验鸡未经放血处理，胸腺中血管内仍留有红细胞，易于观察血管大致位置。管径较大的血管主要分布在小叶间和皮髓质交界处，在皮质中毛细血管密度明显大于髓质中毛细血管密度（图３Ｂ）。 4)鸡胸腺的微血管分布：试验结果显示来自颈总动脉分支的迷走动脉，与颈浅静脉、迷走神经和胸腺链包裹在同一筋膜鞘中，沿途分支的主干供给颈部皮肤上的血管，发出小分支到胸腺的中央部位，进而分支成血管树穿透实质形成毛细血管网。每个独立的胸腺小叶有２条动脉分布。逐渐分支的小动脉沿着皮髓质交界处，注入到皮质和髓质的毛细血管中。而另一类皮质动脉，进入胸腺后，其分支到皮质的毛细血管中。也发现一些发卡状的小动脉，起源于髓质动脉，并且供应皮质的毛细血管，在动脉和静脉血管之间起到通路作用（图４Ａ）。观察发现皮质中的毛细血管比髓质中的分布更为稠密（图４Ｂ）。皮质小动脉呈放射状从皮髓质交界处向外皮层延伸，并汇入到皮质边缘的小静脉中。在外皮层，许多皮质小动脉呈现螺旋、弯曲状（图４Ｃ），也流通到皮质表面的小静脉中。但髓质小动