分子印迹固相萃取联用高效液相色谱分离测定海水中的膝沟藻毒素GTX1,4.pdfVIP

第44 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第2 期 2016 年2 月 Chinese Joumal of Analytical Chemistry 212-217 lHlI: 10.11895/j.~n.0253-3820.150744 分子印迹固相萃取联用高效液相色谱分离测定 海水中的膝沟藻毒素 GTXl ， 4 梅晓顾何秀平王江涛* (中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室，青岛 2661∞) 摘 要采用分子印迹技术，以鸟瞟岭核昔为虚拟模板，本体聚合，合成 GTX1 ， 4 的分子印迹聚合物(MIP) 。 傅里叶红外变换光谱(Ff-IR) 和扫描电子显微镜(SEM) 的结果显示，MIP 具有分布均匀、大小均一的孔穴。 平衡吸附实验表明，分子印迹聚合物(MIP) 比非分子印迹聚合物(NIP) 具有更高的结合容量，对膝沟藻毒素 GTX1 ， 4 有更好的选择性。用 MIP 填充固相萃取小柱(MISPE) ，以 0.1 moνL 乙酸溶液为淋洗液，甲醇，水 (95 :5 , V/V) 溶液为洗脱液时回收率最高，达到 85.0% 。用优化后的淋洗洗脱条件测定微小亚历山大藻和塔 玛亚历山大藻藻液中的 GTX1 ， 4 ，分别为1. 10 和0.99μg/L ， RSD 分别为3.3% 和4.4% ，说明本方法具有较好 的检测限和较高的测定精密度。 关键词 膝沟藻毒素 GTX1 ， 4; 分子印迹固相萃取;分离富集;微小亚历山大藻;塔玛亚历山大穰 1 引 麻痹性贝毒(Paralytic shellfish poisoning , PSP) 是一类以石房蛤毒素(Saxitoxin , STX) 为骨架，具有 四氢瞟岭结构的生物碱分子。根据取代基的不同，可将其分为四类化合物[1] .氨基甲酸醋类毒素 (Carbamate toxins) 、N-磺酷胶甲酷基类毒素(N-Sulfocarbamoyl toxins) 、脱氨甲酷基类毒素( Decarbamoyl toxins) 以及脱氧脱氨甲酷基类毒素(Deoxydecarbamoyl toxins) 。膝沟藻毒素 1 ,4( GTXl ， 4) 就是一类氨 基甲酸醋类毒素，是赤潮发生时海水中存在的主要藻毒素之一，其产毒藻种主要有亚历山大藻属 (忱Al阳e白Zαnd叩叫的A. 阳tαm阳αr陀e阳阳t 、， A. 叩mi仇n阳u础4 旧川um) 的 ι.cωαt化en阳Zαtωum 于 PSP 在贝类中大量富集，人类误食后易中毒，其毒性机理是:PS叩P 的活性部位与神经细胞膜上 Na+ 通 道位点 1 的氨基酸残基高度结合，阻断了 Na+通道，从而产生麻痹作用[6.汀，使人头疼、头晕，呼吸困难， 甚至死亡[剖，因此研究一种快速高效测定 PSP 的方法非常重要。 目前，检测 PSP 的方法主要有生物检测法和色谱法等，其中色谱法是现在最普遍的方法。生物检 测法包括小鼠生物测试法(Mouse bioassay , MBA) [9 ， 10] 和酶联免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay ， ELIM)[Il ， 12]; 色谱分析法主要是高效液相色谱·质谱联用法(HPLC-MS) [町，包括柱前衍生[14J 和 柱后衍生[15] 。虽然 HPLC-MS 具有高选择性和灵敏度、检测限低等优点，但存在费时、成本高且技术要 求高等缺点，限制了其广泛应用。 分子印迹固相萃取技术(MISPE) 作为一种常见的分离富集技术，能够选择性地吸附目标物质，再通 过合适的淋洗、洗脱步骤，使目标物质分离富集。 该技术具有高选择性、高特异性结合能力、高灵敏度和 高回收率等优势，且成本低，耗时少，技术要求不高，己逐渐成为分离富集及检测微量、痕量物质的普遍 方法。 本研究采用本体聚合法，以 GTXl ， 4 结构类似物鸟嘿岭核音为模板，甲基丙烯酸(MAA) 为功能单 体，乙二醇二甲基丙烯酸醋(EGDMA) 为交联剂，偶氮二异丁腊(AIBN) 为引发剂，合成了分子印迹聚合 物，对该