重组别藻蓝蛋白对小鼠H22肿瘤生长及COX2、VEGF和PCNA表达的影响论文.docVIP

　　重组别藻蓝蛋白对小鼠H22肿瘤生长及COX2、VEGF和PCNA表达的影响论文 【摘要】 目的 观察重组别藻蓝蛋白（rAPC）对接种H22细胞小鼠的肿瘤生长及环氧化酶2（COX2）、血管内皮生长因子（VEGF）、增殖细胞核抗原（PA）表达的影响，并初步探讨其可能的机制。方法 昆明小鼠随机分为5组（n=10），即模型组,rAPC低、中、高剂量组（25、50、100 mg·kg-1·d-1）,环磷酰胺组（CY对照组）。各组小鼠左前腋下皮下接种H22肝癌细胞，第2天除模型组外，其余4组分别以不同剂量的rAPC、CY灌胃， 15 d后处死，剥离出肿瘤，称质量.freelor groice and approach its possible mechanism. Methods Kunming mice ized to five groups as the model group, loiddle, and highdose rAPC groups (25,.freelg·kg-1·d-1, respectively), and Cyclophosphamide group (control group) ice in each group. H22 cells pit of the mice. Animals of the four groups, except the model group, ors oved, or inhibition rate calculated; the expressions of COX2, VEGF and PA in the tumor ined immunohistochemically. Results The increase of tumor iddle, and highdose groups odel group(F=23.651;q=4.476-11.307;P 0.01), the expression of PA in middleand highdose rAPC groups odel(F=164.380;q=1.513-31.265;P 0.01). Conclusion rAPC inhibits tumor groice. ［KEY BP）标签的重组别藻蓝蛋白(rAPC)。已有研究表明，rAPC对小鼠S180肉瘤及H22肝癌模型均具有显著的抑制效果3，但其抗肿瘤活性的机制仍未知。环氧化酶2（COX2）是一种诱导酶，多数恶性肿瘤COX2过度表达，且其表达水平与肿瘤的发生、发展、预后和转移有密切的关系。血管内皮生长 1期徐清燕，梁惠，秦松. 重组别藻蓝蛋白对小鼠H22肿瘤生长及COX2、VEGF和PA表达的影响23 因子(VEGF)和增殖细胞核抗原（PA）可促进肿瘤间质血管的生成，也是导致肿瘤细胞不断生长繁殖，进而产生浸润转移的原因之一。本文应用动物实验及免疫组织化学的方法，研究rAPC对昆明小鼠H22 肿瘤组织中COX2、VEGF及PA表达的影响，并初步探讨其可能的机制，以寻找具有高度生物活性的新的海洋药物。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 rAPC 由中国科学院海洋研究所提供。 1.1.2 实验动物及瘤株 清洁级昆明小鼠50只，体质量18～23 g，雄性，由青岛市实验动物中心提供。小鼠肝癌细胞株，由中国医学科学院药物研究所引进，山东省医学科学院药物研究所药理室低温冻存保种，复苏后传5、6、7代的细胞悬液。 1.1.3 主要试剂 新生牛血清，购自Gibico公司。兔抗人COX2抗体、兔抗人PA抗体以及兔抗人VEGF抗体，均购自青岛宏达通生物技术有限公司。DAB显色试剂盒、SP染色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。注射用环磷酰胺（CY，每瓶0.2 g），江苏恒瑞医药股份有限公司生产。 1.1.4 仪器 LEICA RM 2135切片机(德国)，ZMN7803型自动组织包埋机(常州华利电子公司产品)，生物图像分析系统(江苏捷达科技公司提供)，OLYMPUSBX50显微镜(日本OLYMPUS公司产品)，Simple PCI 图像分析系统 （V5.2，pix Inc，美国）。 1.2 方法 1.2.1 动物模型的建立 50只昆明小鼠购进后适应性喂养1周，每只小鼠于右前肢腋窝皮下接种密度为2×109/L的H22瘤细胞悬液0.2 mL。24 h后，随机分为5组：模型组(给予生理盐水0.5 mL灌胃),rAPC低、中、高剂量组（分别给予25、50、100 mg·kg-1·d-1rAPC灌胃）,CY组（给予CY 40 mg·kg-1·d-1腹腔注射），每组10只。各组均连续