针药结合治疗糖尿病性周围神经病变大鼠的实验研究论文.docVIP

　　针药结合治疗糖尿病性周围神经病变大鼠的实验研究论文 郑敏， 张秋娟， 东红升， 施茵， 杨强 【摘要】 目的研究针药结合治疗对实验性糖尿病性周围神经病变(DPN) 的防治作用。方法采用随机分组设计，将大鼠分为模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组，运用链脲佐菌素造成实验性DPN大鼠模型，用神经电生理方法观察坐骨神经传导速度.freela产品，批号S-0130；柠檬酸、柠檬酸三钠、水合氯醛、甲醛、多聚甲醛购自上海试剂一厂；雪莲注射液：新疆中药厂第二分厂生产。 1.3 仪器电子天平，上海天平仪器厂出品；强生稳豪型血糖仪，上海强生公司出品；神经电生理检测仪，Medtronic, Keypoint, Denmark；DK-8D型电热恒温水槽，上海医用恒温设备厂出品；石蜡切片机，德国Lico公司 RM2145 KON；透射电镜，日立H-600。 2 方法 完全随机分组设计，对照实验。 2.1 动物模型制备及分组造模前大鼠禁食过夜，次日用STZ（STZ溶于0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，冰浴中新鲜配制）按55 mg/kg 剂量腹腔内一次注射（参照施新猷《医学动物实验方法》）诱导糖尿病。1周后，用血糖仪测定尾尖血血糖，测血糖前禁食过夜，血糖 ≥15 mmol/L判定为糖尿病鼠。实验前监测血糖，血糖＜15 mmol/L的大鼠予以剔除。正常对照大鼠仅腹腔注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。常规喂养4周，随机选取10只DM大鼠，进行血糖、体重、温度阈值和神经传导速度检测，与造模前大鼠比较以空腹血糖≥15 mmol/L、坐骨神经SNCV、MNCV明显减慢、摆尾温度阈值升高及坐骨神经有髓纤维形态学改变，为实验性DPN大鼠模型。 造模成功后，按随机数字表法随机分为模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组，每组15只。正常组与模型组不作任何治疗，电针组、穴位注射组和针药结合治疗组给予相应治疗，剩余大鼠备用。 2.1.1 电针组（15只）取穴：肾俞（双）、足三里（双）。穴位定位参照《实验针灸学》［2］。接G6805-Ⅱ型电针治疗仪，连续波，频率2 Hz，电流强度以刺激部位皮肌微颤为度，20 min/次，1次/2 d，共治疗12次。 2.1.2 穴位注射组（15只）用雪莲注射液于上述穴位注射，每次轮换取1穴，每穴0.1 ml，治疗次数同上。 2.1.3 针药结合组（15只）具体方法和治疗次数先同电针组，起针后治疗再同穴位注射组。 2.1.4 模型对照组（15只）不作任何治疗，只作与治疗组相同的固定。 2.1.5 正常对照组（15只）选正常NCV）：第1刺激部位在坐骨窝，第2刺激部位在踝部内侧，均用两个针电极经皮插入，电极间距为2 mm，接地于尾部，保持皮温30℃，用方形波（10～20mA，40μs脉波宽）刺激神经,用两个针电极在同侧的足部第2趾骨间肌记录复合肌肉动作电位，记录3对不同M波的潜伏期,取平均值，近端和远端潜伏期作为运动神经在两个刺激部位间的传导时间，用弯角规测量两个刺激部位间的距离。 感觉神经传导速度检测（SNCV）：第1刺激部位在坐骨窝，第2刺激部位在踝部内侧，均用2个针电极在第2趾骨间肌经皮插入， 电极间距为2 mm,接地于尾部。保持皮温30℃，用方形波（2 mA，40 μs脉波宽）记录6个在坐骨窝和踝部激发H反射潜伏期，取最短潜伏期差值，用弯角规测量两个刺激部位间的距离。SNCV（m/s）= 距离/潜伏期差值。 2.2.4 坐骨神经形态学观察水合氯醛将大鼠麻醉，无菌操作取模型组、3组治疗组大鼠和正常组大鼠左侧坐骨神经，取梨状肌下缘坐骨神经约0.1 cm，放入2.5%戊二醛溶液中固定2 h后，冲洗、1%锇酸固定液固定、乙醇和丙酮梯度脱水，然后用1∶1包埋剂和100%丙酮浸透2 h，再放入包埋剂中浸透2 h，放入聚合器中进行聚合，使用LKB-V切片机进行切片，用醋酸铀染色30 min，柠檬酸铅染色15 min，使用日立H-600电镜进行电镜观察。 2.3 统计分析采用SPSS11.0统计软件进行统计学分析。计量结果以±s表示，计量资料差异比较采用方差分析和q检验。 3 结果 3.1 各组大鼠一般情况观察 3.1.1 各组大鼠体重对比观察(见表1)。各组大鼠造模前体重比较无显著性差异（P 0.05）。造模4周后，模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组大鼠体重下降，与正常组比较具有显著性差异（P 0.01）。模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组治疗前后体重无显著性差异（P 0.05），正常组8周后体重增加，与4周比较具有显著性差异（P 0.01）。表1 各组大鼠体重对比观察（略）4周与正常组比较，*P 0.01；8周与4周比较，△P 0.01 3.1.2 各组大鼠血糖对比观察见表2。各组大鼠造模前血