阳离子树脂纯化两面针中氯化两面针碱论文.docVIP

　　阳离子树脂纯化两面针中氯化两面针碱论文 .freelal conditions for separating nitidine chloride from the extract of Zanthoxylum nitidum by selecting appropriate cation exchange resins.MethodsStatic absorption-desorption method Zanthoxylum nitidum， and this method is simple and feasible. Key nitidum; Cation exchange resin; Nitidine chloride; Purification 两面针Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.为芸香科花椒属植物两面针的干燥根，现代研究证明两面针具有消肿止痛、抗菌等活性，同时，在抗癌方面有开发价值1。其中的氯化两面针碱是两面针制剂的主要有效成分，是两面针及其制剂的主要质量控制指标成分，具有抗肿瘤、强心、降血压、抗真菌作用，特别是抗肿瘤活性方面具有研究价值和开发利用前景2。因此，分离纯化两面针中氯化两面针碱具有重大意义。 目前，对于氯化两面针碱的研究多是提取、含量测定等方面的研究，而在分离纯化方面，仅见黄治勋等将粗结晶活性炭脱色，经甲醇重结晶，得氯化两面针碱。此种方法得到粗结晶前已经做了多步工作，再者活性炭对生物碱有吸附作用3，4，最后从两面针根中分得氯化两面针碱的得率很低，仅为 0.149%。王玫馨5用氯仿反复研磨两面针甲醇提取液，所得沉淀再经处理得到氯化两面针碱;另外，用氯仿萃取两面针提取物的酸水溶液，回收氯仿，经多步纯化处理也可以得氯化两面针碱，这两种方法均用到氯仿，对环境污染较大，也对生产者健康不利。 本文采用阳离子交换树脂对氯化两面针碱进行分离纯化。生物碱是一大类碱性含氮化合物，在中性和酸性条件下以阳离子形式存在，能用阳离子交换树脂从提取液中富集分离出来6。氯化两面针碱是叔胺类生物碱，碱性较弱，与用强酸性阳离子交换树脂效果会更好。本实验采用氯化两面针碱转移率较高的提取溶剂进行提取，以氯化两面针碱和总生物碱的吸附率及解吸附率为指标，对4种不同型号的树脂的分离纯化效果和解吸附条件进行了研究，与液-液分配等纯化方法相比，该方法不仅省时省力，操作简单，而且还可以节约大量的有机溶媒，最后纯化效果突出，回收率也较高。 1 材料与仪器 1.1 材料和试药氯化两面针碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：848-9901)，两面针总生物碱对照品(本实验室制备。经HPLC分析，氯化两面针碱含量≥60%)，两面针药材(广西南宁药材市场，广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为两面针Zanthoxylum nitidum);阳离子树脂Ls006，Ls008(西安蓝深树脂有限公司)，Lx-10(西安蓝晓有限公司)，732(南宁市松源仪器化玻有限公司);95%乙醇，盐酸，氢氧化钠，氯化钠，甲醇，等均为分析纯(汕头市西陇化工厂有限公司)，蒸馏水，去离子水(自制)。 1.2 仪器LC-10AT VP高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-10A VP紫外检测器(日本岛津);N2000色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);TU1800紫外可见分光光度计(北京普析通用公司);SB超声波清洗器(上海Branson);LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医分仪器制造有限公司);AL204101型电子天平(Mettler Toledo Group);调速多动振荡器HY-4(国华电器有限公司) 。 2 方法 2.1 总生物碱含量测定以两面针总生物碱对照品为对照，参照文献7的UV测定方法，得两面针总生物碱的含量测定回归方程为Y= 0.078 7 X-0.007 6，r=0.999 9，结果表明两面针总生物碱在0.51～10.20 μg·ml-1与吸光度呈良好线性关系。 2.2 氯化两面针碱含量测定色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6 mm × 25 mm， 5 μm)，流动相为乙腈-水-磷酸-三乙胺(25∶75∶1∶1)为流动相，检测波长为271 nm，流出速度为1 ml·min-1，柱温为30 ℃。参照文献8的测定方法，以氯化两面针碱对照品为对照，得氯化两面针碱的含量测定回归方程为：Y= 600 87 X+159 64，R2=0.999 9，线性范围2.2～44 μg·ml-1。 2.2 两面针提取溶液的制备两面针药材用60%的乙醇溶液提取3次，用量依次分别是6倍量、5倍量和4倍量(60%乙醇溶液对两面针药材的体积重量比)，回流提取时间依次分别为2.0，1.5，1.5 h，回流结束后，过滤，合并3次滤液