阿特拉津分子印迹固相萃取柱的制备及应用论文.docVIP

　　阿特拉津分子印迹固相萃取柱的制备及应用论文 王颜红 霍佳平， 张红 王世成 司士辉 林桂凤 李国琛 刘伟 【摘要】 以阿特拉津为模板分子，α甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，偶氮二异丁腈为引发剂，65 ℃聚合17 h，制备了对阿特拉津具有特异性识别的分子印迹聚合物。将聚合物研磨、过筛、洗涤并装柱，制备分子印迹固相萃取柱.freelol/L的待测物，其回收率也可达到89.3%。与市售C18柱相比，分子印迹固相萃取柱回收时间仅为C18柱的1/3，试剂用量为其1/4，但回收率更好，净化更彻底，减少了杂质峰对分析的影响，提高了灵敏度，利于仪器的保护和保养。应用此方法对实际农业水样进行了检测，结果满意。 【关键词】 分子印迹聚合物; 阿特拉津; 模板分子; 固相萃取; 液相色谱 1 引 言 分子印迹技术(Molecularly imprinted technology, MIT)多用于合成具有识别特性的印迹聚合物。由于印迹过程是将与目标分子(TM)具有结构互补的功能化聚合单体通过共价键或非共价键与目标分子结合，反应完全后洗脱目标分子，从而形成有固定孔穴大小和形状及确定功能团排列顺序的交联高聚物1，并具有专一识别性强、可再生等优势，有广泛的应用前景。目前，MIT已应用于传感器2、人工抗体模拟3及色谱固相分离4～6等方面，已成为化学和生物学交叉的新兴领域之一。 阿特拉津是一种广泛使用的三嗪类除草剂，其在土壤中半衰期较长,甚至残留于部分地区的地下水和地表水中,被列为环境荷尔蒙的可疑物质7，对人体有潜在的“致畸、致癌、致突变”作用8。因此，对此类除草剂的分析和研究具有重要意义。Amalric等9在2008年利用光聚合制备了分子印迹物质，并将其应用于固相萃取，以二氯甲烷为溶剂，检测了农业集水区土壤中残留的阿特拉津及其代谢物的含量。胡玉玲等10制备了另一种三嗪类除草剂特丁津分子的印迹整体萃取棒，并对其萃取性能进行了研究。本研究在水质中将阿特拉津富集和分离，热聚合17 h制备分子印迹固相萃取柱。与市售C18柱相比，本萃取柱具有回收时间短，试剂用量少，回收率高，净化效果好等优点。应用此方法对实际农业水样进行了检测，结果满意。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 AA，分析纯，天津市瑞金特化学品有限公司); 乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA，98%，上海晶纯试剂有限公司); 甲醇、甲苯(分析纯，天津市康科德科技有限公司); 去离子水，MillQ超纯水。2.2 分子印迹聚合物的制备 将154 μL MAA，0.08 g 阿特拉津溶于甲苯中，超声混匀，加入3.04 mL EDMA和6.96 mg AIBN11至10 mL硬质试管中，超声混匀，氮吹10 min，除去溶解氧，密封，在65 ℃水浴聚合17 h，得棒状聚合物。将聚合物研碎，过400目筛，用甲醇乙酸(9∶1, V/V)洗至紫外检测不到阿特拉津，继续用甲醇索式抽提洗至中性，丙酮反复沉降至少3次，除去悬浮粉末，得到分子印迹聚合物(MIPs)，50 ℃真空干燥至恒重。空白聚合物除不加阿特拉津目标物外，其余与印迹聚合物合成条件相同。 2.3 MIPs结合能力的测定 称取20.0 mg MIPs，置于10 mL具塞三角瓶中，加入1 mL不同浓度阿特拉津的甲醇溶液，放入恒温振荡器中振荡16 h，分别离心。取适量上清液，用HPLC测定阿特拉津的游离浓度，根据结合前后浓度的变化计算聚合物对目标分子的最大结合量Qmax。 2.4 MIPs萃取柱的性能研究 取50 mg MIPs干法装柱，制得固相萃取柱，依次用3 mL甲苯、1 mL 1.88 μmol/L阿特拉津的甲苯溶液、纯甲苯、1 mL甲醇过柱，收集洗脱液，用N2吹干，以甲醇定容至1 mL, 进行HPLC检测(液相色谱检测前，样品保存在-70 ℃冰箱中)。 2.5 MIPs柱、C18柱对水质中阿特拉津的富集和分离 取2.4中制得的MIPs柱，用3 mL甲苯活化柱子，再用3 mL甲醇和3 mL水润洗，将100 mL 2×10-8 mol/L阿特拉津的水溶液以1 mL/min的流速过柱，用1 mL水淋洗，阿特拉津用1.5 mL甲醇洗脱。过柱后的残余液在旋转蒸发仪上蒸至近干，用1 mL甲醇复溶，进行HPLC检测，甲醇洗脱液用N2吹干并重新定容，再进行HPLC检测，样品平行测定3次。 取市售的C18固相萃取柱，依次用5 mL乙酸乙酯、5 mL丙酮和5 mL去离子水润洗C18柱，将100 mL 2×10-8 mol/L阿特拉津的水溶液以1 mL/min的流速过柱，N2吹干C18柱，再用6 mL乙酸乙酯淋洗柱子12，收集洗脱液，N2吹干并用1 mL甲醇定容，进行HPLC检测，样品平行测定3次。 2.6 液相色谱测定阿特拉