啤酒中单糖的衍生化hplc—esi—ms测定方法研究.pdfVIP

维普资讯 第23卷第 5期 分析试验室 Vo1．23．No．5 2004年 5月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 20o4—5 啤酒中单糖的衍生化 HPLC—ESI—MS测定方法研究 梁 振 ，徐 瑾 ，张维冰 ，张玉奎 (1．中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心，大连 116011； 2．常州工程职业技术学院，常州213004) 摘 要：单糖类样品在溶液中非常稳定，难于离子化，不适合于进行 ESI-MS检 测。采用 1．苯基．3．甲基．5．吡唑啉酮(PMP)将糖类物质衍生化，HPLC-ESI-MS在 线联用，选择性离子扫描方式对几种啤酒样品中的5种单糖进行了分离检测。 检 出限可达到 80pg。 关键词：HPLC／ESIMS；单糖；PMP衍生 中图分类号：0657．6 文献标识码：A 文章编号：1000一ar720(2004)05—0027—04 近年来，糖类物质在生物学领域的作用已越来 1 实验部分 越被重视，人们将研究的重点放在糖类物质的定 1．1 仪器与试剂 量、定性以及结构分析上，并对此做了大量的研究。 HypersilC】8柱(4．6×150milli．d．5／．am，大连依 由于糖类物质几乎没有光学活性，对分离后的物质 利特公司)；PU．1585高压泵(日本 Jasco公司)。真 进行直接光学检测 比较困难，结合灵敏度、选择性 空过滤器(天津市腾达过滤器件厂)；LCQDuo电喷 等方面的问题，人们多采用衍生化方法将其转化成 雾一离子阱质谱 (美国Finnigan公司)，工作站及数 具有光学活性的物质，与高效液相色谱 (HPLC)．紫 据处理系统(美 国Finnigan公司)。 外可见检测器相结合来进行糖类物质的研究 ¨。， 乙腈、甲醇(色谱纯)；三氯甲烷、乙酸铵、NaOH 此方法不但能提高检测的灵敏度，而且可以使分离 (分析纯)；1．苯基．3．甲基．5．吡唑啉酮 (PMP)(质量 特性得到改善。 分数为 99％，ACROS)；D．半乳糖 (Ga1)、D．木糖 电喷雾．质谱 (Electmsprayionization．MassSpec． (Xy1)、鼠李糖(Rham)(生化试剂)；葡萄糖 (Glu)、D． trometry，ESI．MS)是近 20年来发展起来的一种新型 甘露糖 (Man)(分析纯)。 质谱技术，已广泛的应用于测定寡糖的结构、聚合 1．2 分析条件 度及组成、糖蛋 白的分子量 、寡糖序列及结构均一 液相色谱条件：色谱柱，HypersilC柱(4．6× 性研究等方面 。根据电喷雾．质谱的原理，样 150milli．d．5／．am)；流动相：乙腈．乙酸铵缓冲液 品首先在电喷雾接口离子化，然后离子化的样品离 (22+78)；流速 ：1mL／min；进样量：10ffL。 子进入质谱检测，它适合于分析检测在溶液中容易 质谱条件：鞘气 (80unit／min)，辅助气 (20 离子化的物质 (如氨基酸，肽，蛋 白质等)。单糖类 unitm／in)，喷雾电压(4．5kV)，加热毛细管温度(260 样品属难离子化的化合物，不适合于ESI．MS检测。 qC)，扫描模式：选择性离子扫描(SIM)。 本文利用 1．苯基．3．甲基．5．吡唑啉酮(PMP)将单糖 1．3 5种标准单糖混合样及啤酒样品的衍生 类物质柱