高原鼢鼠肉木瓜蛋白酶酶解物对小鼠免疫功能的影响论文.docVIP

　　高原鼢鼠肉木瓜蛋白酶酶解物对小鼠免疫功能的影响论文 潘明， 赵弋清，侯若彤，刘素君，杨志荣 【摘要】 目的研究高原鼢鼠肉蛋白的木瓜蛋白酶酶解物生理活性功能，对酶解物进行了免疫活性实验。方法通过MTT法和中性红比色法测定其对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、网状内皮系统吞噬功能、NK细胞杀伤毒性，鼠抗体生成脾细胞数(IgMPFC) 的影响。结果酶解物高、中剂量与对照相比有显著差异，而其中以高剂量组的活性最明显.freelmune activity experiment ethod and neutral red colorimetric method easure the effect of the digest on the proliferation of spleen lymphocyte of mice,.freelacrophage and reticuloendothelial system, the killing toxicity of NK cells, and the number of splenocyte induced by rat antibody (IgMPFC). ResultsThe groups iddle dosage have significant difference from the control group, ost obvious activity. ConclusionThe papain digest of Myospalaxbaileyi flesh protein has a significant promotion effect on the cell and humoral immunity of normal rat as eat； Papain； Hydrolysis； Immune function 高原鼢鼠Myospalax baileyi是栖息于青藏高原的一种危害草场和农田的数量巨大的地下啮齿动物。据营养成分的分析结果（《四川动物》待发），高原鼢鼠肌肉除含有亚油酸等对人体有益的不饱和脂肪酸外，还有丰富的蛋白质,钙、镁、铁、锌、磷等无机盐和烟酸、核黄素、视黄醇等维生素，是一种营养价值很高的蛋白质资源。近年的研究表明，蛋白质水解为小肽后就可以被人体吸收［1］，而蛋白质水解产物具有蛋白质无法比拟的生理功能和营养价值。近几年对高原鼢鼠肉的研究集中在脂溶性成分抗缺氧机制上［2～5］，目前尚未见对高原鼢鼠肌肉蛋白酶解液免疫功能的相关研究报道。 为了综合开发利用高原鼢鼠资源，变害为宝，提高高原鼢鼠肉蛋白的营养和利用价值，本研究采用酶法水解高原鼢鼠肉，对酶解液的氨基酸成分进行了分析，并针对免疫系统中T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞，进行了T淋巴细胞转化实验、小鼠抗体生成脾细胞数(IgM-PFC)、NK细胞杀伤毒性实验等免疫学实验，探讨高原鼢鼠肉酶解液对小鼠免疫功能的影响。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 1.1.1 材料 高原鼢鼠Myospalax baileyi：捕于四川省阿坝州若尔盖县。 1.1.2 试剂 木瓜蛋白酶5.8×105 U/g，美国Sigma公司产品；RIMP1640培养基，美国GIBCO公司产品；MTT，ConA，LPS；Alsever溶液；Hanks溶液；0.8%戊二醛溶液；1.51%绵羊红细胞悬液。其它试剂：市售，均为分析纯。 1.1.3 动物 昆明种健康成年小鼠，雌雄各半，体重20～22 g，由四川大学华西实验动物中心提供。 1.2 仪器与设备 DS1高速捣碎机(上海标本模型厂)； KMTD500型电热恒温震荡水槽(上海益恒实验仪器有限公司)；LD510型离心机(北京医学仪器厂)； KQ400超声波发生仪(昆山市超声仪器有限公司)；Phs2 c型pH计(上海虹益仪器厂)； 751G型紫外光栅可见分光光度计(上海分析仪器厂)等。 1.3 方法 1.3.1 酶解液制备［6］高原鼢鼠Myospalax baileyi 肉木瓜蛋白酶解液，酶解液100℃煮沸10 min，冷却至室温，以10 000 r/min，离心5 min，收集上清液。残渣再重复提取两次，合并3次的上清液，静置，分去油脂后真空浓缩，真空干燥得酶解高原鼢鼠肉蛋白，密封冷藏。 1.3.2 酶解液氨基酸分析 采用日立83550型氨基酸分析仪进行测定。 1.3.3 脾细胞悬液的制备将上述昆明小鼠40只，随机分为正常组、酶解物大、中、小剂量组，每组10只，连续灌胃7 d，颈椎脱臼处死小鼠，无菌条件下取脾，置于盛有无菌 Hank’s液的小平皿中撕碎，在200目不锈钢筛上轻轻研磨过网，用无菌Hanks液洗3次，离心10 min/次(