高效液相色谱法同时测定少毛北前胡中6种香豆素论文.docVIP

　　高效液相色谱法同时测定少毛北前胡中6种香豆素论文 陈二林 刘小花 李文 封士兰 胡芳弟 宋平顺 【摘要】 建立了同时测定少毛北前胡中6种香豆素(香柑内酯、蝉翼素、丝立尼亭、顺3′，4′二千里光酰基3′，4′二氢邪蒿内酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的HPLC分析方法。色谱柱为Lot ValidationC18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)柱;流动相为甲醇水;流速为0.8 mL/min;检测波长为323 nm;柱温30 ℃。6种香豆素在一定范围内线性良好，相关系数为0.9992～0.9999;精密度RSD均低于3.95%;平均回收率为93.0%～98.6%。本方法简便、快速、准确;并对其中一种香豆素化合物进行分离纯化，通过核磁、质谱等光谱分析方法确认了此化合物的结构。 【关键词】 少毛北前胡，香豆素，高效液相色谱法，结构 1 引 言 前胡(Radix Peucedani)是一种应用广泛的传统中药.freel白花前胡(P.praerutorum)的干燥根，现代药理研究证明前胡对支气管炎、高血压、冠心病等有一定的疗效1。少毛北前胡(Peucedunum harrysmithii var subglabrum)，商品习称硬杆前胡，主产于甘肃省的陇南、天水、陇东等地区2。 香豆素类成分是前胡的主要有效成分，已测定了正品前胡中总香豆素及部分香豆素的含量3～5，而对于少毛北前胡中香豆素的含量测定未见报道。本研究建立了HPLC测定少毛北前胡中6种香豆素(香柑内酯、蝉翼素、丝立尼亭、顺3′,4′二千里光酰基3′,4′二氢邪蒿内酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的方法。本方法快速、准确，可用于少毛北前胡的质量控制。运用柱色谱及制备HPLC，分离纯化了其中的一种香豆素化合物，利用核磁、质谱及文献对照确认了此化合物的结构，首次从少毛北前胡中分离得到此化合物。此外，分析比较了少毛北前胡与正品前胡中的香豆素成分，为少毛北前胡作为正品前胡代用品可行性研究提供了科学依据。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 Ultimate 3000高效液相色谱仪(戴安公司)，包括四元泵、Photodiode Array检测器、手动进样器;GILSON制备高效液相色谱仪(依利特公司)，包括C18制备柱(250 mm×20 mm, 10 μm), SHIMADZU VPODS分析柱，UV/VIS152检测器;HP5988气质联用仪(美国热电公司);Mercury Plus 400M核磁共振波谱仪(Varian公司);R和CNMR数据及与文献6～9对照确认了它们的结构(见图1)。以HPLC面积归一化法分析，纯度均 少毛北前胡于2006年9月采自甘肃省不同县，经甘肃省药品检验所生药室宋平顺主任药师鉴定。甲醇为色谱纯(山东禹王试剂公司)，水为二次蒸馏水，其它试剂为分析纯，购于天津科密欧试剂公司，色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产。 1. 香柑内酯(bergapten); 2. 蝉翼素(pteryxin); 3. 丝立尼亭(selinidin); 4. 顺3′,4′二千里光酰基3′,4′二氢邪蒿内酯(cis3′,4′disenecioyl3′,4′dihydroseselin); 5. 白花前胡丁素 (peculedanumⅡ， PdⅡ); 6. 白花前胡素E (pecucedanumⅢ， PdⅢ)。 2.2 色谱条件 Lot ValidationC18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)，流动相为甲醇水，洗脱程序如下： 0～9 min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5; 9～18 min，100%甲醇;18～25 min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5。流速为0.8 mL/min; 柱温为30 ℃; 进样量为20 μL; 检测波长为323 nm。 2.3 对照品溶液的制备 准确称取各对照品适量，用甲醇溶解并定容，得到0.0204 g/L香柑内酯、1.964 g/L蝉翼素、0.0264 g/L丝立尼亭、0.1014 g/L顺3′，4′二千里光酰基3′，4′二氢邪蒿内酯、0.1642 g/L白花前胡丁素和0.1106 g/L白花前胡素E的对照品储备液，4 ℃贮存备用。 2.4 样品溶液的制备 分别取甘肃不同产地的少毛北前胡、白花前胡和紫花前胡药材，粉碎，过0.30 mm孔径筛，准确称取1.000 g，分别加氯仿50, 40和30 mL，超声提取，每次30 min，合并滤液，蒸干氯仿，残渣加甲醇溶解，定容至10 mL，经0.40 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液进样，测定。 3 结果与讨论 3.1 化合物4的分离纯化与结构鉴定 3.1.1 分离纯化