高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量论文.docVIP

　　高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量论文 .freelm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：278 nm。结果 绿原酸在0.44～6.60 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 1),平均回收率为97.0%；黄芩苷在0.52～6.18 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 1),平均回收率为98.98%；连翘苷在0.20～2.04 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 3),平均回收率为103.55%；汉黄芩素在0.13～1.76 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 1),平均回收率为96.49%。结论 本方法简便可行、准确、快速,可用于双黄连口服液中上述4种成分的含量测定。 【关键词】 双黄连口服液 绿原酸 黄芩苷 连翘苷 汉黄芩素 高效液相色谱法 含量测定 Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of chlorogenic acid, baicaliin, forsythin and n m×4.6 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid L/min and the detection . Results The calibration curves ethod is simple, practicable, accurate and rapid. It can be applied to content determination of chlorogenic acid, baicaliin, forsythin and m×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)(A＋B＝100%)作梯度洗脱, t＝0→6 min,A：27%；t＝6→10 min,A：30%；t＝10→15 min,A：60%；t＝15→25 min,A：90%；流速：1.0 mL/min；检测波长：278 nm；柱温：25 ℃；进样量20 μL。在上述色谱条件下,4种待测组分与邻近组分达到了基线分离,理论塔板数按绿原酸峰计算不低于3 000。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品适量,置10 mL容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别制成浓度为1.10、1.03、0.51、0.44 mg/mL的对照品母液。 2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取双黄连口服液1.0 mL,置50 mL容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺,分别制备缺金银花、黄芩、连翘的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。 2.3 线性关系考察 分别精密吸取绿原酸对照品母液0.20、0.40、0.75、1.50、3.0 mL,黄芩苷对照品母液0.25、0.50、1.0、2.0、3.0 mL,连翘苷对照品母液0.20、0.40、0.60、1.20、2.0 mL,汉黄芩素对照品母液0.15、0.25、0.50、1.0、2.0 mL,对应加入10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配制成5个浓度的混合对照品溶液,进样测定,记录色谱图。以峰面积为纵坐标,分别以绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素进样量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程。绿原酸：Y＝1.04×107X＋1.40×105, r＝0.999 6；黄芩苷：Y＝3.87×106X－1.26×104,r＝0.999 9；连翘苷：Y＝6.44×105X＋1.74×104,r＝0.999 9；汉黄芩素：Y＝6.30×106X＋1.45×105,r＝0.999 9。结果表明,绿原酸进样量在0.44～6.60 μg范围内,黄芩苷进样量在0.52～6.18 μg范围内,连翘苷进样量在0.20～2.04 μg范围内,汉黄芩素进样量在0.13～1.76 μg范围内,线性关系良好。 2.4 精密度试验 精密吸取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素混合对照品溶液注入液相色谱仪,连续进样5次,绿原酸峰面积RSD＝1.12%,黄芩苷峰面积RSD＝0.86%,连翘苷峰面积RSD＝0.72%,汉黄芩素峰面积RSD＝0.58%。结果表明,所选方法精密度良好。 2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样,测定样品中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的