内分泌动物模型1107概要1.pptx

内分泌系统疾病动物模型的制备、原理及应用;第一节 糖尿病动物模型 ;; 随着人口的老龄化和国民饮食结构的改变,我国糖尿病 (diabetes mellitus,DM )的发病率呈持续性上升趋势。人类的糖尿病是一个复杂的代谢性疾病,主要分为两个类型: 1型糖尿病: 易发生酮病,依赖于胰岛素; 2型糖尿病: 又称非胰岛素依赖型糖尿病(Non-insulin-dependent diabetes melitus,NIDDM),属非酮病型,人类糖尿病 90% 以上为此类糖尿病. ; 2型糖尿病及其并发症的迅速蔓延已经成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。而合适的糖尿病动物模型则是糖尿病研究的重要基础,糖尿病动物模型主要分为实验性糖尿病动物模型、自发性糖尿病动物模型、转基因糖尿病动物模型等。;一.实验性糖尿病动物模型; 1889年Minkowshi在手术切术大狗胰腺以后，首次制作出了多饮多食多尿及尿糖的糖尿病大狗。 袁晖等在1998年制作糖尿病犬模型时，手术切除大狗全部胰腺，在术后3d连续监测血糖，造模成功，血糖超过11．1mmol／L。 ; 2007年，Kurup等也切除了BALB／c小鼠的部分胰腺，同样诱导出类似2型糖尿病动物模型。但此种制作方法，不能够真实的模拟糖尿病血糖情况。;2 化学药物诱导法;1）四氧嘧啶法(Alloxan，ALX) 四氧嘧啶(2,4,5,6-嘧啶四酮)是嘧啶的一种含氧衍生物。在水溶液中以水合物形式存在。它最早由意大利化学家Luigi V. Brugnatelli在1818年分离。常用于糖尿病小鼠的造模。; 四氧嘧啶（Alloxan）为一种胰岛B细胞毒剂，可以使其坏死，不能正常分泌胰岛素。通过产生过氧化氢等超氧自由基选择性地破坏胰岛B细胞，使细胞内DNA 损伤,同时激活多聚ADP 核糖体合成酶的活性,从而使辅酶Ⅰ含量下降,两者共同作用导致mRNA功能受损,引起细胞死亡，导致血中胰岛素浓度下降及高血糖产生，形成胰岛素依赖性糖尿病。; 给药剂量因给药途径不同而不同（均需临用前配) 200mg/kg(腹腔注射),85-100 mg/ kg(静脉注射)。四氧嘧啶制备小鼠糖尿病模型的影响因素很多。有研究报道，静脉注射成模率比腹腔注射高；同等剂量分次给药小鼠糖尿病成模率高；糖尿病小鼠造模的最佳为禁食12、18ｈ后给药造模。 四氧嘧啶致小鼠高血糖模型最佳条件为:四氧嘧啶腹腔注射剂量为200mg/Kg,给药前小鼠禁食16ｈ,选雌性小鼠更佳,选造模后第3天血糖值在15～30ｍmol/l小鼠为造模成功小鼠为宜。; Alloxan糖尿病大鼠是研究糖尿病治疗药物疗效的常用动物模型。Alloxan糖尿病大鼠模型的制备受许多因素的影响：饲料成分、给药次数、给药剂量、动物体重、个体差异等,如不能很好地控制这些因素,就会造成动物死亡率、转阴率高,以致模型的成功率降低,影响实验结果的可靠性。有研究发现用四氧嘧啶制作大鼠糖尿病模型静脉给药优于腹腔给药；用四氧嘧啶以静脉给药方法成功制作大鼠糖尿病模型未禁食情况下需剂量≥40mg/kg。艾静等研究表明，选取雄性Wistar大鼠,体重190～240ｇ,在日照时间10ｈ以上且阳光充足的条件下饲养；给药方式采取两步给药法,剂量为120 mg/kg第1天,100 mg/kg第2天,其成模率最高。; 豚鼠具有抗药性。 四氧嘧啶引起的血糖反应分三个时相,开始血糖升高,持续约2ｈ,继而因β细胞残存的胰岛素释放引起低血糖约6ｈ,12ｈ后开始持久的高血糖。但利用此种方法造模会造成很严重的肝肾损伤，随着剂量增加，所引起的糖尿病越严重，与临床糖尿病发病机制不同。另外，部分采用四氧嘧啶制造的DM动物模型可自发缓解，故目前已经很少应用。 ;2）链脲佐菌素法(STZ); 纯的STZ为白色粉末状，在光照下易分解，因此需低温避光保存。STZ购买后应保存在-20℃。现配现用，用时应溶解在缓冲液中。溶解STZ的缓冲液有生理盐水、柠檬酸缓冲液等，通过不同溶剂溶解STZ后血糖模型的比较，最后指出pH4.5柠檬酸缓冲液可以作为理想的溶剂，因此推荐用柠檬酸缓冲液溶解STZ。; 新鲜配制的柠檬酸缓冲液溶解STZ溶液呈现透明的微黄色，如果颜色变深或者有气泡产生，说明该试剂的稳定性受到破坏，将导致STZ诱导的糖尿病模型失败。给药前，动物需要彻底空腹禁食，一般都是禁食12 h以上。 因STZ的水溶液不稳定，注射时要迅速最好在30 min内注射完，否则药效会降低。; ①直接破坏胰岛β细胞：主要见于注射大剂量STZ后；②通过诱导一氧化氮（NO）的合成，破坏胰岛β细胞； ③STZ激活自身免疫过