SLiCE 体外组装方法的优化和应用.PDFVIP

中国生物工程杂志摇 悦澡蚤灶葬月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁圆园员缘袁猿缘渊员园冤院缘怨鄄远缘 阅韵陨院员园援员猿缘圆猿辕躁援糟遭援圆园员缘员园园怨 杂蕴蚤悦耘体外组装方法的优化和应用鄢 员 员袁圆鄢鄢 冯摇 琪 摇 王摇 颖 渊员天津大学化工学院生物化工系摇 系统生物工程教育部重点实验室摇 天津摇 猿园园园苑圆冤 渊圆天津化学化工协同创新中心合成生物学平台摇 天津摇 猿园园园苑圆冤 摘要摇 杂蕴蚤悦耘渊泽藻葬皂造藻泽泽造蚤早葬贼蚤燥灶糟造燥灶蚤灶早藻曾贼则葬糟贼冤是一种利用细胞裂解物体外无痕组装 阅晕粤 的方 法遥 针对细胞裂解物来源尧姿重组系统的表达及组装片段摩尔比例等方面对现有杂蕴蚤悦耘方法进 行优化遥 首先袁排除了酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的细胞裂解物在现阶段用于体外组装的可能 性遥 同时袁在大肠杆菌阅匀员园月 中导入蕴鄄阿拉伯糖诱导表达的姿 重组系统袁验证所构建的大肠 杆菌的细胞裂解物可在体外拼接 阅晕粤 片段袁并将该种来源细胞裂解物用于后续组装遥 其次袁 设计并构建根据转化子颜色筛选阳性克隆的方法袁并以该方法计算不同摩尔比例片段组装时 的正确率遥 最后袁使用优化过的 杂蕴蚤悦耘 方法袁成功组装可在酿酒酵母体内表达的黑色素合成 模块遥 关键词摇 合成生物学摇 体外阅晕粤组装摇 杂蕴蚤悦耘 方法摇 大肠杆菌摇 细胞裂解 中图分类号摇 匝苑愿怨 摇 摇 阅晕粤组装方法是合成生物学实施过程中的关键技 因和模块遥 术咱员鄄圆暂遥 目前使用的阅晕粤 组装技术主要可以分为两 摇 摇 圆园员猿 年袁云蚤泽澡藻则等咱怨暂针对反应缓冲液组分尧反应 类院第一类是需要使用限制性内切核酸酶和连接酶的 时间和反应温度对杂蕴蚤悦耘组装方法做了进一步的优 栽酝咱猿暂 咱源暂 化和改进袁并进一步扩展了可用于 杂蕴蚤悦耘组装方法的 组装技术袁如 月蚤燥月则蚤糟噪泽 尧月早造月则蚤糟噪泽 和 郧燥造凿藻灶 郧葬贼藻咱圆暂 曰第二类是无需使用限制性内切核酸酶和连接酶 细胞裂解物来源遥 但是对所用的酿酒酵母 渊杂援 的组装技术袁如 韵耘鄄孕悦砸渊燥增藻则造葬责 藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 责燥造赠皂藻则葬泽藻 糟藻则藻增蚤泽蚤葬藻冤等来源的细胞裂解物是否真正具备体外组 咱缘暂 栽酝咱远暂 咱苑暂 装的能力仍然存在疑问袁即不能区分所获得的重组子 糟澡葬蚤灶则藻葬糟贼蚤燥灶冤 尧陨灶鄄云怎泽蚤燥灶 尧郧蚤遭泽燥灶组装 等遥 第 二类方法不受酶切位点的限制袁且得到的组装产物中 是归功于在大肠杆菌内源的重组系统还是所使用的 不存在疤痕序列遥 在澡葬灶早等咱愿暂于圆园员圆 年提出了一种名 细胞裂解物遥 所以需要通过体外实验对酿酒酵母细 为杂蕴蚤悦耘渊泽藻葬皂造藻泽泽造蚤早葬贼蚤燥灶糟造燥灶蚤灶早藻曾贼则葬糟贼冤的组装方法遥 胞裂解物是否具备体外组装能力进行验证遥 此外袁 杂蕴蚤悦耘可以利用大肠杆菌 耘援糟燥造蚤 阅匀员园月 的细胞裂解 陨贼葬赠葬等咱员园暂利用枯草芽孢杆菌渊月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽冤内源的同源 物袁在体外一步组装多个 阅晕粤 片段袁并首次在体外成 重组系统袁在其体内成功拼接了完整的 员远援猿噪遭小鼠 功组装含有其他物种染色体片段的 月粤悦渊遭葬糟贼藻则蚤葬 线粒体基因组和员猿源援缘噪遭的水稻叶绿体基因组遥 这说 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造糟澡则燥皂燥泽燥皂藻冤质粒遥 大肠杆菌细胞裂解物易于 明枯草芽孢杆菌本身就具有可用于片段组装的同源 获得尧相对便宜且便于保存遥 因此与其他不需要使用 重组系统袁可尝试利用枯草芽孢杆菌细胞裂解物进行 限制性内切核酸酶和连接酶的方法相比袁杂蕴蚤悦耘方法 体外组装袁进一步扩展可用于 杂蕴蚤悦耘组装方法的细胞 成本更低遥 利用该方法袁还可