郝老师单克隆抗体的制备资料.ppt

单克隆抗体的制备 应急处置：洗、挤、消毒 24小时内接种疫苗，5针，28天内打完 咬伤较严重者先注射狂犬病病毒抗毒血清和破伤风杆菌抗毒血清，后接种疫苗。 阅读思考 常规抗体的缺点？ 为什么血清中分离的抗体纯度低？ B2 B3 B1 浆1 浆1 浆1 浆2 浆2 浆2 浆3 浆3 浆3 常规抗体 （多克隆抗体） 抗原 1 2 3 纯度低、特异性差、产量低 1、单克隆抗体 由一个B淋巴细胞增殖分化形成的浆细胞群产生的抗体。化学性质单一，特异性强。 被免疫过的B细胞（浆细胞） 设想： 骨髓瘤细胞 B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞：既能产生特异性抗体，又能无限增殖 科勒 米尔斯坦 细胞融合技术 细胞培养 抗原 2、单克隆抗体制备过程 B1、B2、B3…多种淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （设定为A） + PEG 选择培养基 BB AB1 AB2 AB3…AA 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。试验用骨髓瘤细胞（缺陷型）只有D途径，没有S途径。 杂交瘤细胞克隆化培养 抗体检测 产生特定抗体的杂交瘤细胞 获取 单克隆抗体体内制备 单克隆抗体体外制备 优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备 将以下单克隆抗体的制备步骤排序 3、单克隆抗体的应用 ①用于治疗疾病和运载药物，如生物导弹 131I 制备甲胎蛋白的单克隆抗体，与药物结合， 定向运输到癌细胞位置。 癌细胞膜具特殊蛋白质，甲胎蛋白、癌胚蛋白。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 ②作为诊断试剂： 人绒毛膜促性腺激素的单抗 通用名 批准时间 类型 识别抗原 适应症 Muromonab-CD3 1986 mouse CD3 急性肾移植移植排斥 Daclizumab; Basiliximab 1997; 1998 humanized/ chimeric IL-2R(CD25) 急性肾移植移植排斥 Rituximab; Tositumomab; Ibritumomab 1997;2002; 2003 mouse/chimeric CD20 B细胞-非何杰金氏淋巴瘤、 类风湿性关节炎 Alemtuzumab 2001 humanized CD52 慢性B淋巴细胞性白血病 Gemtuzumab ozogamicin 2000 chimeric CD33 急性粒细胞性白血病 Edrecolomab* 1995 mouse EP-CAM 结、直肠癌 Trastuzumab 1998 humanized HER-2 HER-2过表达的转移性乳腺癌 Cetuximab 2004 humanized EGFR 转移性结肠癌、头颈部癌症 Bevacizumab 2004;2006 humanized VEGF 转移性结肠癌,年龄相关性黄斑病变 Infliximab 1998; 2002 chimeric/ human TNF-α 节段性回肠炎、类风湿关节炎, 银屑病性关节炎;强直性脊柱炎 Efalizumab 2003 humanized CD11a 银屑病 Natalizumab 2004 human α4整合素 多发性硬化症 Omalizumab 2003 humanized IgE 过敏性哮喘 Abciximab 1994 chimeric GPⅡb/Ⅲa 冠心病血小板 Palivizumab 1998 humanized RSV 呼吸道合胞病毒感染 科勒 米尔斯坦 杂交瘤技术是上世纪方法学上的一个重大突破，开创了大量生产具有专一特异性的单克隆抗体的新纪元。 1984年米尔斯坦和柯勒被授予诺贝尔生理学或医学奖。 骨髓瘤细胞（缺陷型） 多种细胞 筛选 杂交瘤细胞 B淋巴细胞（多种） 选择培养基 特定抗原注射动物引起免疫反应 加PEG 克隆化培养，抗体检测 筛选 产生特异性（所需）抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体 体内培养 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 特异性强、灵敏度高，可大量制备。 脾脏提取 优点 既能大量繁殖又能产生专一抗体 * Therapeutic mAbs are now big business. infliximab (α TNF-α) and rituximab (α CD 20) each had over $2 billion in global sales during 2004. Six FDA-approved products each had global sales over $500 million in 2004. 预计到2008年，还会有17种抗体类药物上市，其销售额将突破200亿美元，占整个生物制药产业的1/3。 * Thera