生物课件植物dna、rna及蛋白的提取与分析.pptVIP

植物DNA、RNA及蛋白的提取与分析 DNA提取原则 保证DNA结构的完整性 排除有机溶剂和金属离子的污染 排除其它核酸分子的污染 蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度 纯化后不应存在对酶抑制性的物质 植物DNA提取的方法 CTAB法 SDS法 煮提法 DNA提取的基本步骤 材料的准备（新鲜或冷冻保存） 细胞的裂解（液氮研磨，释放内容物） DNA的分离与纯化（酚氯仿抽提） DNA的沉淀与洗涤（2V无水乙醇或2/3V异丙醇） DNA的干燥与溶解（ddH2O或TE） CTAB法流程 CTAB提取液主要成分 CTAB： 十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇或异丙醇沉淀即可使核酸分离出来。 Tris-HCl(pH8.0): 提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏。 EDTA:螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性。 NaCl: 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中。 CTAB法步骤 注意事项 1. 所有用品均需要高温高压，以灭活残余的DNA酶。 2. 所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。 3. 在提取过程，应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。 DNA的质量检测 电泳 带型单一无拖尾现象