肝细胞复合体的低温保存实验研究.pdfVIP

33卷 4期 中 国 生 物 医 学 工 程 学 报 V01．33 No．4 August 2014 2014年 8月 ChineseJournalofBiomedicalEngineering 肝细胞复合体的低温保存实验研究 杨 波 刘宝林 李 娟 沈 力 (上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093) 摘 要：探索微载体 cytodex3与细胞结合的复合体低温保存的可行性。以cytodex3为支架体系，细胞类型采用贴 壁细胞肝细胞，观察低温保存对细胞复合体的影响，包括低温保存对微载体 Cytodex3支架性能的影响，以及复合体 复温后细胞与微载体的黏附存活率、细胞功能指标的代谢情况。实验结果表明，肝细胞复合体低温保存 2周后，微 载体上的细胞活性与单独细胞冻存相比无显著差异，能够正常生存并保持增殖和产物分泌能力。细胞与载体黏附 培养细胞密度大，细胞生物活性高，低温保存复苏后肝细胞功能 良好 ，可用于构建生物人工肝 。 关键词：肝细胞 ；细胞复合体 ；低温保存；代谢指标 中图分类号 TB661 文献标志码 D 文章编号0258—8021f2014)04-0503-05 Experimentalon CryOpreserVati0n ofLiverComposite YANG Bo LIU Bao-Lin LIJuan SHEN Li (SchoolofMedicalInstrumentandFoodEngineering，UniversityofShanghaiforScience＆Technology，Shanghai200093，China) Keywords：bepatocytes；livercompositecryopreservation；metabolism 会引起细胞从载体上脱落。复合体需要低温保存 引言 的不仅是悬浮的肝细胞，更主要是细胞和细胞与细 低温冻存是保存细胞和其他组织的重要方法， 胞和材料的整体结构，只有黏附于载体上处于生理 而有效大量地保存肝细胞和培养细胞 的三维结构 形态的细胞 ，才能继续分化增殖并发挥肝细胞的功 对生物性人工肝的研究有重要作用 。。微载体 能 。因此，低温保存是否会影响肝细胞在微载体 Cytodex3近年来被用于大量培养各种细胞，而培养 上的黏附分化增殖及肝细胞的代谢功能，是本研究 出的众多细胞如何冻存则方法各异。微载体低温 目的。下面探讨本方法是否能够 良好地保持细胞 保存 ，传统的方法是从微载体上收获细胞 ，再将收 的生存率和功能，并与单独肝细胞冻存方法进行 比 获的细胞进行低温保存 ，这种方法有很大缺 陷，因 较，讨论冻存后对微载体 Cytodex3的影响，并对低 为从微载体上收获细胞，一般会损失 10％ ～30％的 温保存复合体细胞的可行性进行论证。 总细胞量 ，严重影响细胞 的低温保存数量 “。因 1 材料与方法 此 ，本实验将对培养达到一定数量 的微载体肝细胞 采用细胞复合体整体低温保存。 1．1 实验仪器 目前，细胞材料复合体及生物组织保存方法都 实验所用 的HL-02肝细胞购于上海细胞生物 是悬浮细胞低温保存方法 的经验性延伸 ，但悬 研究所 ，cytodex3微 载体 (球径 133～215 m， 浮细胞与细胞材料复合物在形态结构方