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课程名称:化妆品化学
課程名稱:生物化學實驗一 日誌編號:96BCEx-39202-A___
授課日期:2007/09/27 週次節次:第週 6、7、8節 本實驗步驟重點在於 (a) 抑制細胞內外 DNase 的活性 (b) 更有效率的除去蛋白質及 RNA 。課程名稱:生物化學實驗一 日誌編號:96BCEx-39202-A2
授課日期:2007/10/4 週次節次:第週 6、7、8節1:利用分光吸光度計進行DNA的基本測量
(1)請於課堂專心聽分光光度計的操作講解。
(2)各組領回上週Exp 1所純化之DNA sample, 取10 uL 之核酸與490 uL的dH2O於eppendorf中進行混合稀釋, 標記為S(sample),另取500 uL的ddH2O置入另一個eppendorf之中,標記為B(blank)。
(3)先將B管之溶液放入測光管中,於吸光度計中進行歸零(波長設為260 nm),然後將B管溶液取出放回eppendorf中,再將S管的溶液放入測光管中,分別測定溶液在260 nm, 280 nm及230 nm波長下的吸光度,登記在記錄紙上。
(4)請計算OD260:OD280的比值,並推估Exp 1 sample的原始濃度及剩餘總量。
實驗2:分光吸光度計測定之干擾(1)
將B及S之eppendorf蓋緊,置於80℃水槽中加熱 5 min (燙!)
將eppendorf取出,立即插入冰筒 3min。
按照實驗1的方法進行DNA的定量測定(230 nm 免)。
測完之後,將B及S之eppendorf蓋緊,重新置於80℃水槽中加熱 5 min (燙!)
將eppendorf取出,放置於bench上使其自然降至室溫。
按照實驗1的方法進行DNA的定量測定(230 nm 免)。
實驗3: 分光吸光度計測定之干擾(2)
將B及S之eppendorf分別加入50 uL 之2N NaOH,搖勻。
按照實驗1的方法進行DNA的定量測定(230 nm 免)。
重覆(1)的動作,再加入 50 uL之2N NaOH,一直到200 uL為止(一共repeat 3次)。
補充:
OD 260 nm = main absorbance of nucleotide
OD 280 nm = main absorbance of protein
260: 280 = protein contamination index
OD 260 nm of 1=
~ 50 ug double strand DNA
~ 40 ug single strand DNA/RNA
評量:無(沒有隨堂考就說無)
作業:無
回應:
此次的實驗,由於分光光度計無法測得230~260nm的值,故進行得不是很順利,但是在本實驗中,學習到了如何操作分光光度計,首先要先歸0(使用一個基準液體),調整所需要的波長(ex:300nm),在將刻度調至該波長的範圍內(ex:3適用於290~460nm,故調到3的位置),如此就能測得相較於基準液體的OD值,OD值的數值得能知菌的生長狀況,若是太多菌,則OD值會相對比較高,因為受到阻擋的光線較多,然而,有一種情況下測得的OD值不見得準確,就是死菌數量過多的時候,測出來的值就不適合使用。
Optical Density (OD)
記錄者:黃昱斌 教師:林翰佐
課程名稱:生物化學實驗一 日誌編號:96BCEx-39202-A___
授課日期:2007/__10_/_11__ 週次節次:第四週 6、7、8節
授課教師:林翰佐 授課班級:39201 (生科二甲)
授課內容摘要
課程進度:
聚合脢連鎖反應法(PCR)的理論與實務操作
課程內容重點:
目的:為了解何為PCR,了解其作用目的及此實驗之原理.
內容:
1.機器開機,設定程式
2.將PCR反應所需之template,10X buffer, dNTP, primers,ddH2O及Taq enzyme分別加入,蓋緊蓋子後放入PCR機器之中。
本研究每組作兩管reaction,以組為單位依續加入反應物, 配方如下:
Template: 2 uL
10X buffer: 2 uL
Primers: 1 uL
dNTP: 2 uL
ddH2O: 12.8 uL
Taq: 0.2 uL
Total 20 uL
3.啟動機器,等待反應完成。
評量:無
作業:無
回應:
這節課我覺得過程很容易,只要將所有的物品安照順序並且安照一定的劑量家在一起就可以了,而這各實驗也讓我知道了PCR的功用,就是可將一小段的基因複製為原來的好多倍,感覺很神奇.
記錄者:______吳瑱碟_____ 教師:_______林翰佐_________
課程名稱:生物
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