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过表达KLF4 重组质粒的构建及其在白血病K562 细胞中的表达.PDF

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过表达KLF4 重组质粒的构建及其在白血病K562 细胞中的表达

21 卷 2 期 生命科学研究 灾燥造援21 晕燥援2 年 月 圆园17 4 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Apr. 圆园17 DOI :10.16605/ki.1007-7847.2017.02.006 过表达KLF4 重组质粒的构建及其在白血病K562 细胞中的表达 * 波 胡海艳 谭明贤 , , ( 庆三峡中心医院,中国重庆 万州404000) 要 为了构建过表达锌指转录因子Kr ppel 样因子4 ( 4, 4)基因的重组质粒pEGFP-KLF4, : Kr pp el-likef actor KLF 观察其在白血病K562 细胞中的表达, 以RT-PCR 法扩增人 4 基因, 构建pEGFP-KLF4 重组质粒; 经酶切及 KLF 测序鉴定后, 将pEGFP-KLF4 质粒电穿孔转染白血病K562 细胞(K562/pEGFP-KLF4 组), 设pEGFP-C1 空质粒 转染K562 细胞(K562/pEGFP-C1 组)及空白K562 细胞作为对照, 荧光显微镜观察EGFP-KLF4 融合蛋白的表达 情况, 同时用抗生素G4 18 筛选阳性克隆并扩大培养建立稳定过表达KLF4 基因的K562 细胞株, 随后用 RT-PCR 检测3 组K562 细胞中 4 的mRNA 表达水平 实 结果显示, pEGFP-KLF4 重组质粒构建成功 该 KLF 质粒转染K562 细胞24 h 后能观察到较高强度的绿色荧光; 经G4 18 筛选出的阳性克隆扩大培养后建立了稳 定过表达KLF4 基因的K562 细胞株; 与对照组相比, K562/pEGFP-KLF4 细胞组KLF4 的mRNA 表达水平明显 升高, 其过表达率为65.7 1% (P0.05) 实 中构建的过表达KLF4 基因的重组质粒pEGFP-KLF4 能在K562 细 胞中高效表达, 为进一步研究其在白血病中的作用奠定了基础 关键词 锌指转录因子Kr ppel 样因子4 基因( 4); 过表达质粒; 电穿孔转染; 白血病; K562 细胞 : KLF 中图分类号 R34 文献标识码 A 文章编号 1007 7847(20 17)02 0125 05 : : : - - - Construction of Recombinant Plasmid for Over-expressing KLF4 and Its Expression in K562 Cells

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