硫酸镍铵增强DAB显色技术.pdfVIP

第 24 卷第 3 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 24 , No. 3 　　　　 　　　　 2002 年 3 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Mar. 2002 359 ( ) 文章编号 2002 技术方法 不同显色方法对免疫细胞化学显色结果的影响 A comparative study of different chromogens applied in immunocytochemistry 1 2 1 1 1 2 ( 张吉强 ,姚 　青 ,刘建军 ,蔡文琴 　　 第三军医大学 : 基础医学部组织学与胚胎学教研室 , 附属西南医院心血管内科 ,重 庆 400038) 　　提 　要 : 目的 　探讨不同显色方法对免疫细胞化学实验结果的影响。方法 　免疫细胞化学 SP 法 ,显色剂分别为 3氨基9乙 ( ) ( ) ( 基咔唑 3amino9ethylcarbazole , AEC 、二氨基联苯氨 Diaminobenzidin , DAB 和硫酸镍铵DAB Nickel ammonium sulfateDAB , N DAB) 。结果 　在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下 ,NDAB 显色法灵敏度最高、反差强 ,AEC 显色效果也较好 ,DAB 效果 最差。结论 　NDAB 显色敏感性较 DAB 高 8～12 倍 ,特别适合于难以显示的抗原。其操作简单 ,仅需在显色时加入少量硫酸镍铵 即可 ,所需抗体浓度大大降低 ,并可结合 DAB 或 AEC 进行双重标记 ,是一种值得推荐的免疫细胞化学显色方法。 ( β ) 　　免疫细胞化学是组织细胞化学中常用的方法之 漂洗 但 ER 再于 4 ℃过夜 。然后用01 mol/ L PBS 漂洗 ,4 ×5 一 ,显色时选用不同的显色剂可以使终产物形成不同 min ; ⑥二抗孵育 ,室温 1 h ;01 mol/ L PBS漂洗 ,4 ×5 min ; ⑦SP 复 合物孵育 ,室温 1 h ;01 mol/ L PBS漂洗 ,4 ×5 min ; ⑧显色。AEC 显 ( 的颜色 , 如 3氨基9乙基咔唑 3amino9ethylcar ( ) 色按试剂盒 博士德 的使用说明进行,DAB 按常规进行。 ) ( bazole ,AEC 为红色 , 二氨基联苯氨 Diaminoben