免疫组织化学基本技术【病理学教研室】.pptVIP

医学资源 免疫组织化学基本技术（2） 武汉大学基础医学院病理学教研室 薛敬玲 副教授 免疫组化技术操作并不困难，虽然染色过程包括很多步骤，但只要注意一些主要问题，就能完成一张质量好的免疫组化切片。 内 容 1.染色前需注意的问题 2.染色中需注意的问题 3.如何进行科研设计 免疫组化基本流程 以石蜡组织为例sp法： 取材---固定---脱水---透明---浸蜡 包埋---切片---烤片---染色开始，脱 蜡---入水---修复---阻断内源性过氧 化物酶---正常羊血清封闭---一抗--- 二抗---三抗---显色 染色前需注意的问题 染色中应注意的问题 一、脱蜡和水化 免疫组化的脱蜡步骤与常规HE脱蜡步骤相同，免疫组化实验室中脱蜡需与HE常规脱蜡分离，以保证脱蜡彻底，否则可能导致染色结果的异常。 二、抗体选择 首先确定一抗种属来源能否适应标本来源（人或动物组织），能否适应标本处理形式（冰冻、石蜡），一抗单克隆抗体（鼠、兔）和多克隆抗体（兔、马、羊等）及二，三抗的配套连接，不同方法连接方式不同（S-P、二步法等），购买商品化抗体应尽量购买原液，质量高，保存时间长，而即用型抗体则现买现用，不可长期保存。 多抗和单抗的比较 均一性，单抗的均一性很