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其他类型的ELISA 1.阻断ELISA 本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。 以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序:   (1)100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干 。    (2) 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。    (3)加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。    (4)加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干。    (5)加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。    (6)加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液 。    (7)用ELISA检测仪测定OD值。 试验中同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。 (2)抗体捕捉ELISA 本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期,所以检测出IgM,则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种,其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性, IgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验(IgM antibody capture ELISA,简称MAC-ELISA)或反向间接ELISA法是利用抗人Igm(μ链特异性)抗体包被固相载体,作为“捕捉抗体”吸附待检血清中的Igu。 ? 经过洗涤除去血清中IgC及其他成分,再加入特异性抗原与“捕捉”到的相应IgM抗体结合;然后加入酶标抗体和底物显色进行测定。 该方法的主要程序为:   ① 用抗u链(抗IgM重链)抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜,洗涤三次、抛干   ② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干   ③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干   ④ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液   ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。 (3)布ELISA (C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大学者Blais, B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即涤纶布为固相载体,这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大,可为免疫反应提供较大的表面积,提高反应的敏感性,且容易洗涤,不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似,只是载体不同。 以对布氏杆菌抗原的检测为例,C-ELISA的主要程序为:   (1) 首先把抗布氏杆菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并经洗涤及封闭;   (2) 加被检样品并于室温下感作30分钟,然后洗5次;   (3) 加酶标记的抗布氏杆菌抗体,于室温下感作30分钟,然后洗涤5次;   (4) 加入底物液显色;   (5) 测定OD值。

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