PCR数据分析和处理.pptVIP

2008-11-27;PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）是一种选择性体外扩增DNA或cDNA的技术。 特点：它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 分类：最常用的FQ-PCR与RT-PCR。 ;RT-PCR：逆转录PCR，将mRNA逆转录后再进行PCR扩增 ，产物通过电泳检测基因的表达情况，又称半定量PCR。 FQ-PCR：实时荧光定量PCR，在RT-PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过曲线对未知模板定量的方法。 联系及区别：RT-PCR只能进行定性；FQ-PCR才能做到定量。;以FQ-PCR为例，体系中的组分如下 10×buffer(Mg2+ free) MgCl2（25mM） dNTP（25mM） 上游引物（10 μM） 下游引物（10 μM） 探针或染料（10 μM） Taq酶（5u/μl） ddH2O cDNA模板 ;stage1 94℃ 2min Stage2 探针：94℃ 20sec，55℃（基因的复性温度） 20sec，60℃ 30sec，45 cycles 染料：94℃ 20sec，55℃（基因的复性温度） 20sec，72℃ 30sec，80℃ 20sec，45 cycles;go;返回;用样本的基因的Ct值减去对应的内参的