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Western Blot常见问题及处理 中国教育装备采购网2013-07-19 17:57 点击(178)次 分享至: 　　1、western blot 的优点 　　Answer:灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。 　　2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白? 　　Answer: 　　a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞; 　　b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性; 　　c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。 　　3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢? 　　Answer: 　　a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长， 　　b) 也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。 　　4、我做的蛋白质分子量很小(10KD)，请问怎么做WB? 　　Answer:可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按步骤即可。 　　5、我的目的带很弱，怎么加强? 　　Answer:可以加大抗原上样量。这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。 　　6、胶片背景很脏，有什么解决方法? 　　Answer:减少抗原上样量，降低一抗浓度，改变一抗孵育时间，提高牛奶浓度。 　　7、目标带是空白，周围有