1162 唾液富组蛋白pdf.PDF

【名称】唾液富组蛋白 【英文名】histatins in saliva 【别名】 【概述】 唾液中的富组蛋白主要来源于腮腺、颌下腺、舌下腺。其组成特点是分子 中含较多的碱性氨基酸(约48%)，其中一半为组氨酸，这些碱性氨基酸与其功 能密切相关。富组蛋白不同于其他唾液蛋白的一个显著特点，是其 RNA仅局限 于人的腮腺及颌下腺中，由此推测其功能仅局限于唾液中。 【原理】 激光散射光系指一定波长的光通过溶液时遇到抗原-抗体复合物，光线被折 射，发生偏转。偏转角度可以从0～90°，这种偏转的角度可因光线波长和离 子大小不同而有所区别。散射光的强度与抗原抗体复合物的量成正比，同时也 和散射夹角成正比，和波长呈反比。测定方法有终点法和速率法两种。。 【试剂】

(1)稀释液：0.2mol/L NaHPO 63ml，0.2mol/L NaH PO 37ml，0.5mol/L NaCl 100ml，NaN 1.0g，蒸馏水加至 1000ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，分 装，4℃保存备用。 (2)反应液：聚乙二醇(PEG，分子量6000)4.6g溶于稀释液中，略微加热助 溶，补足 100ml，用0.45μm微孔滤膜过滤分装。4℃保存备用。 (3)校正标本样：自制校正标本样时，可根据 ICS校正卡上所列各种蛋白成 分的含量，应用国产标准参考标本样，根据公式C V ＝CV 换算成校正卡上含   量。亦可将无溶血、无乳糜的正常人混合标本样测出有关成份的含量后，略作 调正，使与校正卡上含量一致，然后过滤分装，低温保存。  (4)质控唾液：可将数十份正常人唾液混合，加1g/L NaN ，直接用C 或D 稀释度即可。 (5)抗血清：可用国内特异性好，亲和力强，效价高的抗血清，选择最适稀 释度，用0.45μm微孔滤膜过滤。以已知含量参考血清作为标准抗原，用ICS 手动或自动方式测出该成分的含量，使与校正卡上所列含量一致，然后分装 4℃保存。 【操作方法】 (1)自动速率散射比浊法：以Beckman ICS- Ⅱ型为例，可用进口配套试 剂，也可用自制试剂 ，经校正后使用，按照操作说明书进行 。现 以免疫球蛋白 G(IgG)为例 。 ①先用电脑稀释器将待测样本稀释至 1 ∶36或1 ∶216。 ②将待测的 IgG校正电脑卡及 IgG的抗血清电脑卡先后插入仪器 内，有关 的试验参数及标准曲线即自动记录在微处理机中。 ③将带有搅拌棒的 600μl反应液的反应管插入反应室中。 ④用42μl加样器将欲测定的稀释标本和 IgG抗血清分别注入反应管中， 透过显示屏，于60s内自动显示 IgG的含量。 (2)手动散射比浊测定法：由于自动试剂受到许多限制，手动操作可替代 自 动试剂，对于微量蛋白质测定的继续开发是十分重要的。 ①抗原制备：为了确定抗血清的使用比例，须确定最适合的抗原含量。ICS 最佳检测范围应是 0.2～20mg/L 之间，最适抗原中点浓度为 2mg/L(指反应管中 的终浓度)。其计算公式为： 稀释倍数＝ 例如 ：参考唾液 IgG 值为 12g/L 时代入公式则 将参考唾液用稀释液稀释后，备用，并以同样方法配制其他浓度，选择多 点，制作校正曲线。该样品应清澈透明，其本底速率值 (RU)不应超过 50，散射 值 (SU)不应超过 30，才为合用。 ②抗血清制备：取特异性强。效价高的抗血清进行适当稀释，经0.45μm