抗药性菌株性质研究详解.pdf

2000年 12月 中国油料作物学报 Chinesejournalofoilcropsciences 第22卷第4期 December2000 Vo1．22No．4 1)l＼ 抗药性菌株性质研究 石忘琦 ，周 明国 叶钟音 (南景夏五 螽 ； 苏南京21o09j) 摘要：通过赞外诱导在PDA平扳上获得抗多菌灵或茁核净的油菜菌核病菌抗药性突变体，突变频率 2．4 ×10 ～2．4×10 。突变体与敏感亲本菌株相比菌丝生长存在个体差异，仅85．7 的抗菌核净突变体表现致 病，而所有敏感菌株及抗多菌灵突变体均能致病。抗菌核净突变体比敏感亲本菌株产菌核能力弱，并对渗透 压表现敏感。研究表明抗菌核净突变体的生存竞争能力低于野生敏感菌和抗多菌灵突变体 关键词：油菜菌棱病菌i多菌灵 ；菌核净{抗药性 中田分类号：$435．654 文献标识码：A 油菜菌核病 (Sclerotiniasclerotiorum)是危害我国油菜生产的重要病害．多年来一直使用以多菌灵 为主的苯并咪唑类杀菌剂和甲基托布津防治。据报道，8．sclerotiorum病原菌已经对多菌灵产生抗药性． 而且抗药性菌株分布范围逐年扩大，抗性比例上升，导致多菌灵田间防效下降 。选用二 甲酰亚胺类杀 菌剂如速克灵、扑海因、乙烯菌核利和菌核净等是治理多菌灵抗药性的有效途径 。由于菌核净对油菜菌 核病防效显著，有望在多菌灵抗药性菌株高频率发生地区取代多菌灵 ]但在防治各类核盘菌引起的病 害方面．有关二甲酰亚胺类杀菌剂的应用至今未有 田间产生抗药性突变体的报道 ]。本试验通过研究 油菜菌核病菌抗菌核净突变体和抗多菌灵突变体的菌株性质．推测病原菌在 田间产生的抗药性行为，为 菌核净的应用及其抗药性风险评估提供依据。 1 材料和方法 l_1 供试材料 供试菌株M04、MO5、MO6为田间分离的抗多菌灵菌株．W04、W05、W06、PN061、PN064、PN062、 PN095、PN090、PN107、PNll3为多菌灵敏感菌株。供试药剂 95％菌核净由浙江温州农药厂生产，98 多菌灵由江苏吴县农药厂生产。 l_2 S．sclerotiorum抗药突变体诱导方法 将供试菌株经25C培养 2d制成直径 5mm的菌碟(以下简称菌碟)后．接人盛有PD培养基的三角 瓶中，振荡培养(25C、120rpm)4d后收集新鲜菌丝，加入适量无菌水，用磁力搅拌器以2000rpm悬浮菌 丝。取菌丝悬浮液 30 分别涂于含菌核净或多菌灵 1O、5O、1001~g／ml的PDA平板上．距 25W UV灯 250ram处照射．设置照射时间0、15s、30s、45s、60s、90s、10s和 120s等处理，然后置于 25℃黑暗培养 4d 以95 致死剂量(时问)处理并在含菌核净或多菌灵PDA平板上长出的菌落即为抗药突变体 。试验 重复3次，以不用药培养和不照射处理为对照。挑取单细胞菌丝片段进行菌株纯化。 1．3 抗性突变体致病性测定方法 将抗多菌灵、菌核净突变体和野生敏感亲本菌株制成菌碟，接种到生长一致的油菜叶片上，室 内 25℃培养 60h后测量病斑直径。病斑直径大于 25ram为强致病菌株，10~25mm为中等致病菌株，小于 10mm为弱致病菌株 ，不侵染为不致病。重复3次。 收稿El期 20o0—07—10 基金项 目江苏省 “九五”农业科技重点攻关项 目(BE96371--2) 作者简介：石志琦(196 )，女 湖南邵阳人，硬士，主要从事乐菌剂毒理及抗药性研究 石志琦等：油菜茵核病菌时多茵灵、茵核净抗药性菌株性质研究 55 1-4 抗性突变体生长量测定方法 将紫外诱导产生的抗多菌灵或菌核净突变体及相应的敏感菌株制成菌碟，在PDA平板上 25VN 养2d后，测定菌落直径。野生敏感菌株和突变体以每菌株 10个菌碟接人 10OralPD培养基中， 25v~． 件下振荡(120rpm)培养4d后，取菌丝冻干称重。重复3次。