Percoll, Nycodenz, metrizamide 作自形成密度梯度离心一） 概述.PDF

CsCl，Percoll, Nycodenz, metrizamide 作自形成密度梯度离心 Yu .05.1 一） 概述： 近年来用重金属盐 （主要是 CsCl ）分离生物大分子的平衡等密度离心；用Percoll （由 瑞典 pharmacia-Biosystems AB 开发的胶体硅材料，即在硅颗粒外包覆 PVP 塑料、直径在 15nm～20nm 以下的胶状小颗粒）自形成梯度分离细胞和亚细胞构造；用 Nycodenz 和 metrizamide （由挪威的Nycomed pharma A/S 开发的碘化物梯度材料）的自形成梯度分离整 细胞、亚细胞构造、核蛋白、病毒等方面的研究工作有令人满意的进展【参考文献（1）】， 开发商也提供了很多技术资料、配制了很多实用的标准液用于梯度制备。 二） 自形成梯度离心分离的优点： l 不需要预先制备梯度，简化了离心工艺。 l 用于制备自形成梯度的材料化学性质稳定，对被分离物质无损害。 l 无毒性。 l 某些材料（如Percoll，Nycodenz ）在高速 （RCFav ＝20,000 ×g～30,000 ×g ）短时间 （10 分～60 分）就能自形成较缓和的或较陡的复合 （由凸指数过渡到凹指数）梯度曲线， 用于不用样品的分离纯化。 l 开发商提供了部分由梯度材料和稀释液配置的各种密度的等渗液，方便了用户配置。 l 可与样品混合直接做自形成密度梯度实验（如生物大分子的CsCl 平衡等密度离心），也 可以预先离心制备自形成梯度后在梯度表面铺置样品再进行密度梯度离心。 l 可以用各种转头 （固定角式、甩平、 垂直、垂直管、区带转头）制备自形成梯度，被 分离样品的容量范围很 。 l 由于近年来利用自形成密度梯度离心的论文增多，用户可以根据需要找到相应的参考资 料（文献3 ）。 l 自形成梯度材料的扩散很慢，一旦形成梯度，梯度曲线变化很小。同样，沉降在其等密 度区的样品扩散也很小（等密度离心）。对于利用梯度材料预先离心制备的自形成梯度 作速率－区带离心（Rate-zonal ）,样品的沉降速度变化稳定，重复试验的成功率高。某 些材料（如Percoll ）一旦形成密度离心梯度后其梯度曲线静置数周后变化仍很小。 三） 重金属盐类自形成梯度有关计算公式（参考文献4 ） l 梯度斜率： 2 2 2 dr w r 1.1 10 N r ························① dr b 0 b 0 l 密度范围： 1.1 10－2 N 2 2 2 ρ—ρ ＝ （r r ) ······················② 2 1 0 2 1 2b l 密度梯度形成后与初始密度相同的点的位置 1 1 r ＝ [ ]2 ···························③ c 2 2 3 r r r r 1 1 2 2 1 l 任意点r 处密度： 1.1 10－2 N 2 2 2 ρ＝ρ－ （r r ) ·······················④ r i 2b 0 c l 达到自形成梯度所需时间 （用小时表示） 2 T ＝K(r －r ) 2 1 K 是反比例于：溶液扩散系数的