第四章酶学概论剖析.ppt

酶反应动力学 酶浓度对酶反应速度的影响 当底物浓度大大超过酶浓度时，反应达到最大速度。如果此时增加酶的浓度可增加反应速度，酶促反应的速度与酶的浓度成正比关系。 酶反应动力学 激活剂对酶反应速度的影响 提高酶活性的物质，称为激活剂 激活剂的种类 （1）无机离子： 金属离子(钾、钠、镁、锌、钙） 阴离子(氯离子)、 氢离子 （2）简单有机分子： 某些还原剂、乙二胺四乙酸（EDTA） (3)具有蛋白质性质的大分子物质 主要是激活酶原 无活性的酶原 有活性的酶 激活作用 酶反应动力学 激活剂对酶反应速度的影响 使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。 酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似 b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物 酶反应动力学 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 专一性不可逆抑制作用 非专一性不可逆抑制作用 抑制作用 抑制剂对酶反应的影响 酶反应动力学 抑制剂对酶反应的影响 不可逆抑制作用：抑制剂与酶的活性中心的功能基团共价结合而抑制酶的活性,不能用透析或超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性 可逆性抑制：抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 酶活力测定 酶活力 酶活力也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速率（reaction rate）来表示。 酶反应速率 用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间 酶活力测定 酶的活力单位 1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力， 即：1个酶活力单位：是指在最适条件下，1分钟内转化1u摩尔底物的酶量，或转化底物中1微摩尔有关基团的酶量。(25℃,最适底物浓度和最适pH） 实际应用中，酶活力单位定义为单位质量的酶（或单位体积的酶，mg，g，mL等），在最适条件或规定条件下（T，pH、激活剂，离子强度），单位时间（min）催化转化底物的量（底物一般用饱和溶液）。 酶活力测定 酶的比活力 代表酶的纯度，比活力用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示，对同一酶来说，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。用IU/mg蛋白、 Kat/mg蛋白表示。 比活力大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。 比活力=活力IU/mg蛋白=总活力IU/总蛋白mg 转化数 在单位时间内每一活性中心或每分子酶所能转换的底物分子数。 用Kcat 表示 目前，以酶为基础的制革生物技术在清洁性、环境友好性方面独具特色,这些技术在制革工业的广泛应用,是解决制革工业严重污染,促进制革工业持续发展的重要途径。 浸水酶 酶法脱毛 脱脂酶 软化酶 制革常用酶制剂 制革中常用的酶制剂，主要是蛋白水解酶，其次是脂肪酶 目前，在准备工段的各个工序几乎都与酶的应用，如浸水、脱脂、脱毛、软化，也可用于鞣后蓝湿革的软化与脱脂 工业用的蛋白酶一般纯度不高 制革常用酶制剂 中性蛋白酶 枯草杆菌1.398中性蛋白酶 主要用于脱毛，也可在软化工序作为辅助酶软剂和部位差处理剂用 pH=7时最稳定，pH10或pH5.5失活；pH=7时最适反应温度为45-50℃，60 ℃以上失活 Cu2+，Hg2+，Al3+，Pb2+，EDTA抑制，Ca2+无影响 放线菌166中性蛋白酶 主要用于脱毛及软化时的辅助软化剂 最适pH=7-8；最适温度为40 ℃ Ca2+有明显激活作用，EDTA和明矾抑制 栖土曲霉3.942蛋白酶 主要用于脱毛，也可用于软化和浸水 最适pH=6.8-7.5；最适温度为45 ℃； 此酶还有一个碱性最适pH （pH=10 ） Na2SO3，硼酸盐明显激活； Hg2+ ， Pb2+抑制 制革常用酶制剂 碱性蛋白酶 2709碱性蛋白酶 主要用于脱毛，也可用于浸水 最适温度：45-50℃； 最适pH=9~11 209碱性蛋白酶 主要用于脱毛 最适pH=9~11 最适温度为40~50 ℃ Ca 2 + ，Mn2+ 有激活作用， Cu2+ Mg 2 + 严重抑制 制革常用酶制剂 酸性蛋白酶 537酸性蛋白酶 生产菌种：宇佐美曲霉 主要用于毛皮加工中皮板的软化，也可用于蓝湿革软化 pH稳定范围2.0~4.0，最适pH=2.0 适宜温度范围为30~50 ℃，最适温度：50℃，超过50℃ 迅速失活； Cu2+，Hg2+，Al3+抑制，Ca2+ 、Mn2+、 Mg2+激活 3.305酸性蛋白酶 生产菌种：黑曲霉 pH稳定范围2.