中国鲎基因组微卫星富集文库的构建及分析.PDFVIP

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2017-07-04 发布于安徽
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中国鲎基因组微卫星富集文库的构建及分析.PDF

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中国鲎基因组微卫星富集文库的构建及分析 1, 2 1, 2 1, 2 1, 2 1, 2 宁晔凤 , 黎中宝 , 戴刚 , 上官静波 , 李清荟 (1. , 361021; 2. , 361021) 摘要: 本研究旨在从 DNA 分子水平上研究中国鲎(Tachypleus tridentatus)种群遗传多样性及种群结构等相关信息, 以期为保护其野生群体种质资源提供科学依据。本研究通过生物素—磁珠富集法筛选微卫星标记, 构建中国鲎基因组微卫星文库。基因组DNA 经FastDigest Tru1I 酶切后, 选取400 bp~1000 bp 片段, 用生物素标记的(GT)15、(CT)15 混合探针与其杂交, 杂交复合物与链霉亲和素磁珠结合, 捕获含有重复序列的微卫星片段, 纯化后连接PMD19-T 载体克隆, 构建基因组微卫星文库。从334 个阳性克隆中随机选取 196 个片段大于400 bp 的阳性克隆进行测序, 共获得 127 个微卫星序列, 其中完美型占 69.3% 、非完美型占 11.0%、复合型占 19.7%。除探针使用的GT 和 CT 的重复序列外, 还筛选到多碱基 GCT 、 TGG 、AAAC 、ACAA 、GATTT 、TTTTA 的重复序列。根据微卫星序列设计选择合成 40 对引物, 结果显示其中3 对具有较高多态性, 可作为进一步评价中国鲎野生种质资源等遗传信息的有效遗传标记。关键词: 中国鲎(Tachypleus tridentatus); 磁珠富集; 微卫星文库中图分类号: S917 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2015)04-0015-06 doi: 10.11759/hykx20140319001 (Tachypleus tridentatus) [7], , , DNA , 4 , [1] (Arthropoda)(Merostomata) [8-9], (Xiphosura) (Limulidae) [10-11], (Tachypleus), , [2] Li [12]7 ,  [3], (GT)15(CT)15 [4] , , PCR , , [5], , , 13~15 , [6], 1 材料与方法 , ,