miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响.PDFVIP

1136 生 物 工 程 学 报 骆爱玲 等/miR-29b2c 重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn July 25, 2017, 33(7): 1136−1144 DOI: 10.13345/j.cjb.170003 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·医学与免疫生物技术· miR-29b2c 骆爱玲，杜春园，赵雪梅，梁继超，陈勇 430062 , , , . miR-29b2c . , 2017, 33(7): 1136–1144. Luo AL, Du CY, Zhao XM, et al. Effects of recombinant adenovirus Ad-miR-29b2c on HGC-27 cell proliferation and migration. Chin J Biotech, 2017, 33(7): 1136–1144. 摘 要: 构建了miR-29b2c 重组腺病毒Ad-miR-29b2c ，考察了其对HGC-27 、MGC-803 胃癌细胞增殖及迁移 的抑制作用。采用PCR 从基因组扩增miR-29b2c 片段，并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV 中，构建穿 梭质粒pAdT-29b2c ，经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经Pme Ⅰ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183 感受态， 产生重组腺病毒质粒 Ad-miR-29b2c ，再经 Pac Ⅰ线性化后转染 293A 细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染 HGC-27 细胞，通过MTT 及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c 对HGC-27 、MGC-803 细胞增殖及迁移的影响。 采用Western blotting 检测Ad-miR-29b2c 对HGC-27 、MGC-803 细胞δ-catenin 蛋白表达的影响。酶切、测序及 荧光定量 PCR 结果表明重组腺病毒构建成功，miR-29b 及 miR-29c 在 HGC-27 细胞过表达。MTT 实验表明 Ad-miR-29b2c 能显著抑制HGC-27 、MGC-803 细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c 能显著抑制HGC-27 、 MGC-803 细胞迁移。此外，Ad-miR-29b2c 能显著降低HGC-27 、MGC-803 细胞δ-catenin 蛋白表达水平。综上 所述，构建了miR-29b2c 的重组腺病毒，并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27 和MGC-803 的增殖及迁移，该 作用可能与miR-29 抑制HGC-27 、MGC-803 细胞δ-catenin 蛋白表达有关。 : miR-29 ，胃癌，重组腺病毒，基因治疗 Received: January 4, 2017; Accepted : April 6, 2017 Supported by: Young Talent Project of the Education Department of Hubei Province (No. . Corresponding authors: Jichao Liang. Tel/Fax: +86-27 E-mail: liang529114@163.com Yong Chen. Tel/Fax: +86-27-886638