免疫胶体金银技术介绍.ppt

（一）胶体铁的制备 通过FeCl3的煮沸完成 1946年--FeCl3直接煮沸法 1951年--FeCl3溶于甘氨酸和氨水的混合液中 1983年--FeCl3倒入煮沸的二甲砷酸钠溶液或FeCl3与二甲砷酸钠溶液一起煮沸 1986年--水合联胺-二甲砷酸- FeCl3煮沸法 也可用二甲砷酸代替二甲砷酸钠 具体步骤： 二甲砷酸钠溶液+浓盐酸+水合联胺+FeCl3 将混合物加热煮沸至变成深棕色的胶体砷酸铁，室温冷却 再以二倍体积的二甲砷酸钠缓冲液稀释即可标记 该法制备的铁胶体呈深棕红色，颗粒1nm左右，pH4-8稳定，4℃贮存备用。 （二）抗体的标记和纯化 胶体铁在pH7.4时通过离子键与抗体IgG（PI6.8-7.3）结合而不影响抗体活性； 胶体铁的等电点为7.8-7.9，标记时用0.1mol/L碳酸钾将胶体的pH调至7.4（每毫升胶体0.2-1mg蛋白量） 纯化标记抗体---层析柱 CM-Sephadex C-50 Amberlight CG-50 抗体鉴定：免疫斑点法和免疫细胞化学染色法 制备的胶体铁深棕红色，颗粒小，稳定性高，其pH接近中性，标记效果好 （三）免疫胶体铁细胞化学染色 （1）染色步骤 1) 石蜡切片常规