第五节食品中维生素类的介绍.ppt

（二）维生素A的测定 1、比色法 国标第二法。  维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑作用，生成蓝色化合物，在波长620nm处有特异吸收。 适用于维生素A含量较高的样品。 该法的主要缺点是生成的蓝色络合物的稳定性差，比色测定必须在6s内完成，否则蓝色会迅速消退，造成极大误差。 2、高效液相色谱法  国标第一法。 （1）原理： 试样中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱将维生素A及维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。 内标物：苯并[e]芘标准液 流动相：甲醇＋水（98＋2） 紫外检测器：波长300nm （2）样品处理： ①皂化：准确称样于皂化瓶中——加无水乙醇，搅匀——加抗坏血酸（抗氧化剂），加苯并[e]芘标准液（内标物）——加氢氧化钾（1＋1）——于沸水浴回流30min，使皂化完全——立即放入冰水中冷却。 ②提取：皂化物移入分液漏斗——加乙醚提取——弃去水层。 ③洗涤：用水洗乙醚层，至水层不显碱性。 ④浓缩：将乙醚提取液脱水（经无水硫酸钠过滤）后移入旋转蒸发器的球形蒸发瓶中——55 ℃水浴中减压蒸馏——蒸发瓶中剩余2mL乙醚时，取下蒸发瓶，用氮气吹干——加乙醇溶解提取物——离心，上清液供色谱分析。 （三）维生素E的测定 1、比色法  维生素E与FeCl3反应，Fe3+被还原成Fe2+，Fe2+可与 —联氮苯发生颜色反应，呈红色，因此在520nm处测定吸光度，可定量测定样品中VE的含量。 2、GC法 3、HPLC法 维生素E测定的GC分析条件化合物 检测器 固定相 检测波长 内标物α—生育酚 FID SE—30 275nm 十六烷基 棕榈酸酯α—β—生育酚γ—δ— FID DB—5 300nm 胆甾烷胆固醇 （程序升温，260℃ 300℃） （四）β—胡萝卜素的测定 1、高效液相色谱法 国标第一法。 试样中的β—胡萝卜素，用石油醚-丙酮（80＋20）混合液提取，提取液于旋转蒸发器上蒸发至干，残渣用少量石油醚溶解，然后经三氧化二铝柱纯化，收集洗脱液，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用C18反相柱进行HPLC分析。 流动相：甲醇＋乙腈（90＋10） 紫外检测器：波长448nm 2、纸层析法 国标第二法。 试样经过皂化后，用石油醚提取食品中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。 （五）维生素D的测定　　1、比色法　　维生素D与三氯化锑在氯仿中产生橙黄色物质，于500nm处定量测定。 　　2、HPLC法　　样品经过抽出脂肪、碱性皂化、乙醚抽提不皂化物以及经过毛地黄皂苷—硅藻土和皂土二次柱层析，将脂肪、VA和VE等干扰物除去，然后注入液相色谱仪中，用含0.7%乙醇的异辛烷为流动相，以紫外检测器，波长254nm处进行测定，即可求出样品中VD的含量。 　（六）维生素K的测定　　维生素K易分解，因此提取样品中的VK不采用皂化方法，而采用有机溶剂直接提取。一般植物样品经干燥后，将其置于有机溶剂如乙醚、丙酮、石油醚中剧烈振摇，把VK抽提出来。动物组织样品也要预先干燥，再用有机溶剂抽提。　　GC法主要用于VK3的测定。 目前测定VK1的常用方法为HPLC法。 高效液相色谱法测定维生素K1 　　维生素K1广泛存在于绿色蔬菜中。　 蔬菜中的维生素K1经石油醚提取后，注入经磷酸盐处理的氧化铝色谱柱中进行分离，除去干扰物。收集含VK1的淋洗液流分，浓缩定容后注入高效液相色谱C18柱，用紫外检测器测定。以外标法计算试样中VK1的含量。 流动相：甲醇＋正已烷