基于葡萄糖葡萄糖氧化酶H2O2L-酪氨酸辣根过氧化物酶反应体系的荧光毛细分析法测定血糖.pdfVIP

第 39 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第 8 期 2011 年 8 月 Chinese Joumal of Analytical Chemistry 1 18l~ 1185 001: 10. 3724/SP. J. 1096.2011. 01181 基于葡萄糖/葡萄糖氧化酶/H 0 /L-酶氨酸/辣根过氧化物酶 2 2 反应体系的荧光毛细分析法测定血糖 李乔婿l 高秀峰* 2 杜运动l 陈婷梅l 李永生* 1 I (四川大学化学士程学院，成都 610065) 2( 四川大学华商基础医学与法医学院，成都 610041) L 摘 要 建立了葡筒糖(0)/葡萄糖氧化酶(GûD)!H2 2/ - 酶氨酸/辣根过氧化物酶(HRP) 新荧光反应新体系， Û 并将此反应体系与荧光毛细分析法(FCA)结合，开发一种能够真正实现血糖测定的新葡萄糖酶荧光毛细分析 法GE-FCA) 。经优选得到的新反应体系最佳条件为:GûD 和 HRP 浓度均为 20∞ UIL， L-酶氨酸浓度为 1.0 mmo旺，磷酸盐缓冲液的 pH=8.5，反应温度为 35.C ，反应时间为 20 min。通过测定葡萄糖标准样品，得到 GE-FCA 法测定葡萄糖的线性范围是 5.0~ 140μmollL:相对标准偏差4.0%: 检出限为 2.65μmollL。本方法 已成功用于临床血清样品中葡萄糖的测定，其间收率在 98% ~104% 之间。 GE-FCA 荧光增强法操作简单，样 品和试剂用量极少(9μ0 ，线性响应范围宽、抗干扰能力强，易于普及推广。 关键词 荧光毛细分析法;葡萄糖氧化酶;辣根过氧化物酶;血糖 1 引 目前，临床测定血糖的方法有邻甲苯股法(0-Toluidine boric , 0-TB) [IJ 和酶法。 o-TB 法操作简单，成 本低，但特异性较差阳，且邻甲苯胶试剂不稳定，毒性大。酶法是利用酶的高选择性催化进行分析的方 法。根据酶种类的不同，酶法可分成己糖激酶-6 磷酸葡萄糖脱氢酶法(Hexokinase and glucose- 6-phos- phate dehydrogenase , HK-G6PDH) 、葡萄糖脱氢酶法(Glucose dehydrogenase. GDH) 和葡萄糖氧化酶过氧 化物酶(Glucose oxidase-peroxidase. GOD-POD) 法。 HK-G6PDH 法[3， 4J 是目前国际上公认的参考方法，特 异性好，但试剂成本较高;在 GDH 法中，报道最多的是以毗咯哇琳酿(Pyrroloquinoline quinone. PQQ) 为 辅基的方法阻，商品化的血糖仪中多采用该原理;PQQ 法只使用一种酶，反应一步完成，但选择性较差， 受麦芽糖、木糖、半乳糖等物质干扰严重，常导致血糖测定值假性升高山;GOD-POD 法[7J 操作简便，试剂 来源广且价格便宜，是我国卫生部推荐的血糖测定方法。但该法中常用的今氨基安替比林和酣试剂皆 为中等毒性物质。为解决上述存在问题，本研究基于 GOD-POD 复酶催化反应体系，用无毒且价廉的荧 光素铀作为 POD 的底物，通过荧光素铀的荧光猝灭对血糖进行了测定L8J 。但该方法线性响应范围窄、 样品预稀释倍数高，抗干扰能力差，血样除蛋白后仍存在干扰等。本研究组导人 L 酷氨酸，提出葡萄糖 L (0)/葡萄糖氧化酶 (GOD)础2 2/ - 酷氨酸/辣根过氧化物