凝集反应.ppt

实验四 细胞凝集反应 一、实验目的 学习研究细胞凝集反应的方法,了解细胞发生凝集反应的原因。 了解颗粒性抗原与可溶性抗原凝集反应的原理。 二、实验原理 凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。 大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。 三、相关理论知识 颗粒性凝集反应（agglutination）是一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。 1.直接凝集反应 颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。 1)玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。 2.间接凝集反应 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质，如人（O型）和动物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的反应，敏感性比直接凝集反应高得多。 注：可溶性抗原通常为 三、实验用品 材料： 马铃薯块茎 实验试剂： (1)磷酸缓冲液：分别称取氯化钠7.2g和磷酸氢二钠1.48g，用蒸馏水溶解，混合后用蒸馏水定容至1000ml，调pH值至7.2。 (2) 2%兔血细胞：以无菌方法抽取兔的静脉血（加肝素抗凝剂）用生理盐水洗5次，每次2000r/min离心5min，最后按红细胞体积加生理盐水配成2%兔血细胞液。 (3)生理盐水。 实验仪器:捣碎机，离心管 ，冷冻离心机，载玻片，光学显微镜。 四、实验步骤 (一) 细胞凝集反应 1. 2％兔血红细胞悬液制备 新鲜兔血加抗凝剂，生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，按红细胞压积用生理盐水配成2％兔血红细胞悬液。 2. 土豆凝集素制备 土豆2克，加10ml PBS，浸泡2h。 3. 细胞凝集反应 土豆凝集素1滴、2％兔血红细胞液1滴。 载玻片上混匀，静置20min。 4. 对照 PBS1滴、2％兔血红细胞液1滴。 五 、 实验结果 实验组发生可视的细胞凝集反应.即红细胞凝集成团。 对照组中兔血红细胞经低渗盐溶液处理后,细胞破裂,内容物释放,细胞成透亮的圆形,较正常生理状态下红细胞要亮及大。 六 、思考题 1.血红细胞的凝集现象的原理? 2.为什么兔血红细胞经低渗盐溶液处理后,还具有圆形结构,并变的透亮? 七、实验报告要求 绘制兔血红细胞图。 简图示意细胞的凝集现象。 简图示意兔血红细胞低渗下的细胞形态。 * * 2)试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反应（Wright test）均属定量凝集反应。 鸭 血 红 细 胞(非哺乳类) 未凝血 凝血 （二）细胞膜的渗透性 1. 低渗溶液 1)试管一支： 2)兔血红细胞液1ml； 3)蒸馏水10ml； 结果溶血，溶液变透明。 2. 等渗溶液 1)0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵 2) 0.17mol/L硝酸铵、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸铵、 3) 0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮等8种溶液进行同样实验，步骤同上。 *