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浙江理工大学学报,第26卷,第4期,2009年7月Journal of Zhejiang Sci-Tech UniversityVol.26, No.4, Jul. 2009文章编号: 1673- 3851(2009)04- 0602- 06SHP-2酪氨酸磷酸酶C-SH2结构域的表达纯化和NMR研究李少飞,郭江峰,丁先锋(浙江理工大学生命科学院,杭州310018)摘　要: SHP-2是一种非跨膜型蛋白酪氨酸磷酸酶。将其N末端结构域C-SH2克隆至原核表达载体pGEX-2T中,命名为pGEX-2T-C-SH2。该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达于菌体上清液中,经GST亲和层析柱和FPLC分子筛柱纯化后,目的蛋白纯度可达98%。质谱分析表明,目的蛋白相对分子量与理论值基本相同。在最适表达条件下,1 L的M9培养基能够高效表达并获得12 mg C-SH2蛋白,NMR结构和活性位点的分析表明,目的蛋白能正确折叠并呈规则的空间结构。关键词: SHP-2; C-SH2;蛋白纯化;同位素标记; NMR; HSQC中图分类号: Q78　　　文献标识码: A引　言SHP-2属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员之一,作为细胞因子、生长因子及其它胞外刺激因素的下游信号分子,表达于机体的各种组织和细胞中,与细胞增殖、分化、转移、死亡等重要的生命活动密切相关[1-3]。SHP-2是由PTPN11基因所编码的,其