生物化学复习-酶5-2-1-2-1资料.ppt

在以3-磷酸甘油酸、ATP、NAD+为底物的反应液中，加入3-磷酸甘油醛脱氢酶后，于340nm处测定OD值变化（反应NAD+向NADH的转化），从而计算酶活力 酶的活力单位定义为：每分钟消耗1nmol NAD+所需要的酶量 酶活力= OD值变化量×1000 6.2×反应时间×酶量 OD变化量指某一时刻读取值与过一定反应时间再读取的OD值之差；6.2是NADH 1000nmol/ml时的消光系数 ３、酶的比活力 比活力（比活性）是指每单位质量样品中的酶活力，即每mg蛋白质中所含的U数或每kg蛋白质中含的kat数； 有时用单位体积中酶的活力单位表示比活力。 酶的比活力即表示酶的含量（纯度），是表示酶制剂纯度的一个指标。 如在酶的提纯过程中，随着酶逐步被纯化，其比活力也在逐步增加。 二、 酶的制备 不同使用目的，要求酶制剂的纯度高低不同，如科学研究常需要高度纯化甚至制成结晶 酶绝大多数是蛋白质，故一般常用的酶的分离纯化方法，也就是常用来分离纯化蛋白质的方法 特别需要注意：酶具有催化活性，在整个提纯过程中，要防止强酸、强碱、高温和剧烈搅拌等，以避免酶活力的损失 酶的分离纯化步骤 1.选材：选用酶含量高的材料 工业上大多采用微生物发酵的方法来获得大量酶制剂。优点：不受气候、地理条件的限制，动、植物体内的酶大多可从微生物体内找到，微生物繁殖快，产酶量也丰富。还可以通过选育菌种来提高酶的产量和用廉价原料大量生产。 生物体所产生的酶有胞内酶和胞外酶之分，所以在处理方法上有所不同。 如果是胞内酶则需要先用捣碎、砂磨、冻融或自溶等方法将细胞破坏，然后再用适当的盐溶液或缓冲液把酶提取出来——抽提 如果是胞外酶，则无需破坏细胞的手续，而直接用体液如唾液、胃液、乳汁或微生物的发酵液进行纯化 2.破碎细胞：机械破壁，化学破壁，酶破壁，冻融破壁 等 别构酶的脱敏作用 别构酶经加热或用化学试剂等处理，可引起别构酶解离，失去调节活性，称为脱敏作用，脱敏后的酶表现为米氏酶的动力学 [Asp] 天冬氨酸转氨甲酰酶用对羟汞苯甲酸处理 别构酶的别构作用的学说 主要有两个学说： 协同模型（齐变模型，MWC）是由J.Monod,J.Wyman和J.P.Chengeux三人提出，所以以三人名字的首字命名 序变模型（循序模型，KNF ）由D.Koshland等三人提出，也是以三人首字母命名 齐变模型 别构酶的所有亚基或者全部呈坚固紧密的、不利于结合底物的“T”状态；或者全部是松散的、有利于结合底物的“R”状态。这两种状态间的转变对于酶的每个亚基是同时、同步的。 齐变模型能够很好地说明同促正协同效应和异促正、负协同效应 不能说明同促负协同效应 序变模型 1.别构酶的每个亚基具有两种构象状态（R和T）； 2.当配体不存在时，别构酶只有一种构象状态存在（ T态）。只有结合配体后才诱导T态向R态转变 3.别构酶的构象以序变方式进行,而不是齐变 4.在一个亚基中结合底物所引起的构象改变可以增加或减少同一分子中其他亚基的底物结合亲和性, 即可能是正协同效应, 也可能是负协同效应. 非底物调节的效应,用序变模型说明较好. 序变模型 能够解释同促正、负协同效应和异促正、负协同效应但难于象齐变模型那样建立数学模型 不论那一个模型都难解释所有变构酶 这些模型都显过于简单，目前尚缺乏更好的学说。 酶原的激活 没有活性的酶的前体称为酶原。 酶原转变成有活性的酶的过程称为酶原的激活。这个过程实质上是酶活性部位形成和暴露的过程。 举例： 胰凝乳蛋白酶原的激活 胰蛋白酶原的激活 胰凝乳蛋白酶原的激活 胰凝乳蛋白酶原由245个氨基酸组成,具有5对二硫键的单链蛋白。活性中心的His57、Asp102、Ser195来自B、C链 胰蛋白酶原的激活过程 胰蛋白酶是一个关键酶，胰脏中酶原（胰凝乳蛋白酶原、弹性蛋白酶原、羧肽酶原等）的激活都要通过胰蛋白酶的作用。在胰脏中存在着较丰富的胰蛋白酶抑制剂，抑制胰蛋白酶的活性。 酶原在胰脏中提早活化是胰腺炎的特征，严重的可以致命。 酶原与酶原激活的生理意义： 1、保护组织器官本身免受酶的水解破坏； 2、保证酶在特定时空发挥催化作用； 3、酶原可视作酶的储存形式。 如：凝血和纤维蛋白溶解酶类以酶原的形式在血液循环中运行，一旦需要便不失时机地转化为有活性的酶，发挥其对机体的保护作用。 可逆的共价修饰(reversible cavalent modification) 概念：简称共价调节酶，是这类酶由其他酶对其结构进行共价修饰而使其在活性形式（或高活性形式）与非活性形式（或低活性形式）之间相互转化。 1.共价调节酶的特点： (1)可逆地共价修饰与去修饰； (2)可将引